預(yù)適應(yīng)聯(lián)合后適應(yīng)對大鼠腦缺血-再灌注損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　觀察缺血預(yù)適應(yīng)、缺血后適應(yīng)以及兩者聯(lián)合應(yīng)用對大鼠腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用，對大鼠腦缺血/再灌注損傷后缺血腦組織中HSP70蛋白、不同亞型HSP70基因表達(dá)以及磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt(PI3K/Akt)、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)信號通路活性的影響。
　　方法:
　　120只SD大鼠隨機(jī)分為5組:假手術(shù)組、腦缺血/再灌注損傷模型組、預(yù)適應(yīng)組、后適應(yīng)組以及預(yù)適應(yīng)+后適應(yīng)組。除假手術(shù)組大鼠

2、外，其余各組均用線栓法閉塞大腦中動脈120 min后再灌注48 h，制作腦缺血/再灌注損傷模型;預(yù)適應(yīng)在造模24和1h前采用3個循環(huán)的缺血15 s/再灌注30 s的方法誘導(dǎo);后適應(yīng)于再灌注前采用3個循環(huán)的再灌注30 s/缺血15s的方法誘導(dǎo)。再灌注48 h后，分別檢測大鼠神經(jīng)功能、腦梗死灶體積、腦組織氧化應(yīng)激損傷生化指標(biāo)以及神經(jīng)元凋亡情況。50只大鼠隨機(jī)分為5組，再灌注48 h后，分別用法免疫組化檢測HSP70蛋白的表達(dá);用Real-t

3、ime PCR檢測HSPA8、HSPA1A及HSPA12B基因表達(dá);用Western Blot檢測磷酸化Akt（p-Akt）和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　與模型組比較，預(yù)適應(yīng)與后適應(yīng)均能明顯改善大鼠腦缺血/再灌注損傷后的神經(jīng)功能和減少腦梗死灶體積，兩者保護(hù)作用強(qiáng)度相似，無明顯差異，預(yù)適應(yīng)聯(lián)合后適應(yīng)改善大鼠腦缺血/再灌注損傷后的神經(jīng)功能和減少腦梗死灶體積的作用明顯強(qiáng)于單獨(dú)的預(yù)適應(yīng)或后適應(yīng)。

4、腦缺血/再灌注后，大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性降低和丙二醛(MDA)含量增高，預(yù)適應(yīng)略有升高SOD活性和降低MDA含量的作用，而后適應(yīng)能顯著升高腦組織中SOD活性和降低MDA含量，預(yù)適應(yīng)聯(lián)合后適應(yīng)后，升高腦組織SOD活性、降低MDA含量的作用進(jìn)一步增加，明顯強(qiáng)于單獨(dú)的預(yù)適應(yīng)或后適應(yīng)。與模型組比較，預(yù)適應(yīng)和后適應(yīng)均能減少缺血區(qū)腦組織的神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量，而后適應(yīng)減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量的作用強(qiáng)于預(yù)適應(yīng)，兩者聯(lián)合應(yīng)用較少腦缺血/再灌注損

5、傷后神經(jīng)元凋亡的作用增強(qiáng)。假手術(shù)組腦組織HSP70呈微量表達(dá)，與假手術(shù)組比較，腦缺血/再灌注損傷模型組腦組織HSP70呈輕度表達(dá)，而預(yù)適應(yīng)和后適應(yīng)組HSP70陽性細(xì)胞明顯增多，呈中度表達(dá)，預(yù)適應(yīng)+后適應(yīng)組可見大量HSP70陽性細(xì)胞，呈高度表達(dá)。大鼠腦缺血/再灌注后，缺血側(cè)皮質(zhì)、皮質(zhì)下和海馬組織中HSPA8、HSPA1A及HSPA12B3個基因的表達(dá)量均略微升高，兩處升高的模式相似。單獨(dú)預(yù)適應(yīng)或后適應(yīng)均能夠顯著升高HSPA8、HSPA1A

6、及HSPA12B基因的表達(dá)量，其中HSPA1A的表達(dá)量則在預(yù)適應(yīng)時升高明顯，而HSPA8 mRNA在后適應(yīng)時表達(dá)最高，HSPA12B的表達(dá)量兩者無明顯差異;將預(yù)適應(yīng)聯(lián)合后適應(yīng)，上述3個基因的表達(dá)量均較單獨(dú)采用預(yù)適應(yīng)或后適應(yīng)時顯著增高。Western Blot檢測p-Akt和p-ERK1/2結(jié)果顯示:與對照組比較，腦缺血/再灌注后p-Akt和p-ERK1/2表達(dá)水平升高;預(yù)適應(yīng)能輕度升高腦缺血/再灌注后p-Akt和明顯抑制p-ERK1/2

7、的表達(dá)，而后適應(yīng)明顯升高腦缺血/再灌注后p-Akt和輕度抑制p-ERK1/2表達(dá);預(yù)適應(yīng)和后適應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用后，升高p-Akt和抑制p-ERK1/2表達(dá)的作用明顯強(qiáng)于各自單獨(dú)應(yīng)用。
　　結(jié)論:
　　1、預(yù)適應(yīng)、后適應(yīng)對大鼠腦缺血/再灌注損傷有保護(hù)作用，兩者聯(lián)合應(yīng)用能進(jìn)一步增強(qiáng)上述作用;
　　2、預(yù)適應(yīng)、后適應(yīng)均能上調(diào)HSP70的表達(dá)，但兩者影響的HSP70亞型不同;
　　3、預(yù)適應(yīng)和后適應(yīng)均能升高p-Akt水平和抑制