兩種植物病毒dsRNA序列分析.pdf

1、單引物擴(kuò)增技術(shù)(SinglePrimerAmplificationTechnique，SPTA)是以dsRNA為模板，獲得基因組全序列克隆的方法，這種技術(shù)在雙鏈形式的病毒基因組序列研究中得到廣泛應(yīng)用。由于dsRNA病毒基因組核酸結(jié)構(gòu)的特殊性，其基因組的研究仍然是一個(gè)難題。特別在對(duì)病毒的基因組一無(wú)所知的情況下，常規(guī)方法的應(yīng)用受到了限制。1992年Lambden等提出并應(yīng)用單引物擴(kuò)增技術(shù)成功地?cái)U(kuò)增了人類輪狀病毒基因組中較大的基因片段，在克隆

2、dsRNA病毒基因組技術(shù)方面取得了突破。在此基礎(chǔ)之上，Attoui等人將這一技術(shù)不斷地改進(jìn)和完善，在動(dòng)物病毒基因組序列的研究中取得了成功。目前SPAT技術(shù)已經(jīng)成熟，成為克隆dsRNA病毒基因組已知或未知基因片段的主要方法之一。盡管這一技術(shù)在動(dòng)物dsRNA病毒的研究中應(yīng)用較多并取得了成功，但是在植物dsRNA病毒基因組研究方面應(yīng)用較少。 本文介紹了SPAT技術(shù)在兩種植物dsRNA病毒研究中的應(yīng)用。2007年4月，我們?cè)诤贾萁紖^(qū)田間

3、采樣的過(guò)程中采集到帶有明顯病毒侵染癥狀的蘿卜病株。感病的蘿卜植株矮縮嚴(yán)重并且表現(xiàn)明顯的花葉和黃邊癥狀，這與幾種常見(jiàn)的單鏈RNA病毒侵染蘿卜后引起的癥狀不同。我們利用改進(jìn)后的SPAT技術(shù)，以感病蘿卜葉片組織為材料，克隆了一種雙鏈RNA病毒基因組片段的全長(zhǎng)cDNA。序列分析結(jié)果和dsRNA分析結(jié)果證實(shí)，感病的蘿卜植株表現(xiàn)出的特別的癥狀是這種雙鏈RNA病毒與其他幾種病毒復(fù)合侵染引起。在此研究基礎(chǔ)上，我們對(duì)SPAT。技術(shù)的的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)一步優(yōu)化后

4、應(yīng)用于杭州地區(qū)玉米粗縮病病原鑒定中。由于國(guó)內(nèi)報(bào)道的兩種雙鏈RNA病毒水稻黑條矮縮病毒(Riceblackstreakeddwarfvirus，RBSDV)與玉米粗縮病毒(MaizeroughdwarfFijivirus，MRDV)都可以引發(fā)玉米產(chǎn)生類似的癥狀，并且兩種病毒在形態(tài)學(xué)、血清學(xué)、寄主、傳播介體以及基因組電泳圖譜方面存在諸多相同或相似的特征，一直以來(lái)研究人員對(duì)玉米粗縮病的致病病原存在著不同意見(jiàn)，有研究人員認(rèn)為水稻黑條矮縮病毒是導(dǎo)

5、致這一癥狀發(fā)生的原因，而另外的一些研究人員則認(rèn)為玉米粗縮病毒才是引起玉米粗縮病的病原。我們利用改進(jìn)后的SPAT技術(shù)對(duì)杭州地區(qū)發(fā)生的玉米粗縮病病原進(jìn)行研究，克隆得到了三條基因組片段全長(zhǎng)cDNA，隨后的序列分析結(jié)果表明，在核苷酸水平和氨基酸水平上，三條片段都與水稻黑條矮縮病毒存在很高的同源性，而與玉米粗縮病毒的同源性較低。這一結(jié)果證實(shí)該地區(qū)發(fā)生的玉米粗縮病病原是水稻黑條矮縮病毒而并非玉米粗縮病毒。 本文利用改進(jìn)后SPAT技術(shù)以杭州地