神經(jīng)節(jié)苷脂與亞低溫聯(lián)合治療對TBI大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及機制.pdf

1、目的：
　　近年研究發(fā)現(xiàn)，給予顱腦創(chuàng)傷患者神經(jīng)節(jié)苷脂和亞低溫治療，能夠減輕其腦組織水腫和氧自由基損害，從而減輕其腦組織損傷，明顯改善預(yù)后，但是二者聯(lián)合治療對腦組織的保護(hù)作用及機制尚不清楚。本研究以大鼠顱腦創(chuàng)傷模型為研究對象，將大鼠隨機分入假手術(shù)組（S組）、對照組（C組）、神經(jīng)節(jié)苷脂組（GM）、亞低溫組（MHT）及二者聯(lián)合治療組（GM+MHT），檢測各組大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力、神經(jīng)功能、腦組織水腫程度和血腦屏障通透性的變化，以探討各項治

2、療對TBI大鼠神經(jīng)的影響；測定腦組織一氧化氮（NO）和氧自由基中間產(chǎn)物丙二醛（MDA），細(xì)胞色素C（CytC），細(xì)胞凋亡蛋白Caspase-3的變化，以探討神經(jīng)節(jié)苷脂和亞低溫治療對腦組織作用的機制，為臨床應(yīng)用提供可靠的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、實驗動物及分組：SD雄性大鼠，體重220g~260g，購入后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。實驗動物隨機分為五組，每組10只：①假手術(shù)組（S組）做術(shù)前準(zhǔn)備，備皮、開骨窗但不進(jìn)行電子打擊，保持肛溫

3、36~37℃；②打擊對照組（C組）術(shù)后進(jìn)行電子打擊，不進(jìn)行亞低溫治療；③神經(jīng)節(jié)苷脂治療組（GM組）術(shù)后進(jìn)行電子打擊，給予神經(jīng)節(jié)苷脂腹腔注射治療；④亞低溫治療組（MHT組）術(shù)后進(jìn)行電子打擊，給予亞低溫治療；⑤亞低溫聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂治療組（GM+MHT組）術(shù)后進(jìn)行電子打擊，給予神經(jīng)節(jié)苷脂腹腔注射和亞低溫治療。
　　2、實驗分兩部分進(jìn)行：第一部分實驗，SD大鼠50只，隨機分成以上5組，于實驗處理后36~48h利用Morris水迷宮進(jìn)行學(xué)習(xí)

4、和記憶能力評估（n=10），48h進(jìn)行腦核磁檢查和神經(jīng)功能評分（n=10），完畢后處死大鼠，留取腦組織進(jìn)行指標(biāo)含水率（n=5）和血腦屏障通透性檢測（n=5）；第二部分實驗SD大鼠50只，隨機分成5組，術(shù)后48h進(jìn)行腦核磁檢查（n=3），處死大鼠，留取腦組織ELISA法（n=7）分別測定腦組織NO、MDA的含量（n=7），采用蛋白印跡法（Western-blot法）分檢測腦組織細(xì)胞色素C和細(xì)胞凋亡蛋白 Caspase-3（n=3）水平。<

5、br>　　結(jié)果：
　　1、學(xué)習(xí)和記憶能力評估：在定位實驗中，S組的逃避時間為27.63±8.34s，其余四組逃避時間明顯增加，與C組逃避時間55.42±14.92s相比，GM組47.12±11.89s、MHT組46.78±12.33s、GM+MHT組38.21±10.35s逃避時間縮短，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；在記憶實驗中，各組大鼠的表現(xiàn)與定位實驗的表現(xiàn)極為相似，S組穿越平臺次數(shù)為7.2±2.4最多也最穩(wěn)定，GM組3.5±

6、0.9、MHT組3.7±0.8、MHT+GM組4.2±1.1穿越次數(shù)減少，但是較C組2.6±0.7穿越次數(shù)增多，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2、神經(jīng)功能缺陷評分：與S組神經(jīng)功能缺陷評分2.12±0.42相比，其余四組顱腦創(chuàng)傷大鼠的神經(jīng)功能評分分值明顯增加（P<0.05），與 C組分值12.5±1.14相比，GM組7.03±0.92、MHT組6.84±0.89及GM+MHT組4.26±0.68神經(jīng)功能缺損評分均有明顯改善（

7、P<0.05）；與 GM組、MHT組相比，GM+MHT組神經(jīng)功能缺陷評分明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、腦組織含水量：與S組含水量76.16±4.11％相比，其余四組腦組織含水量均明顯升高（P<0.05）；與C組腦組織含水量84.23±6.99%相比，GM組含水量80.85±5.78%、MHT組含水量79.43±5.38%、GM+MHT組含水量78.12±4.34%，均降低且具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；

8、 GM+MHT組腦組織含水量與GM組、MHT組相比降低，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4、 Evans藍(lán)測定法檢測血腦屏障(BBB)通透性結(jié)果：術(shù)后各組BBB通透性均增加（P<0.05），與 C組14.2±2.12ug/g相比，GM組9.06±1.34ug/g、MHT組8.63±1.45ug/g、GM+MHT組7.53±1.22ug/g通透性減低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與 GM組、MHT組相比，GM+MHT治

9、療組的BBB通透性的改善作用顯著（P<0.05）。
　　5、腦部核磁表現(xiàn)：S組大鼠在48h后MRI表現(xiàn)正常，未見異常信號影，中線結(jié)構(gòu)居中，C組腦水腫及血腫明顯，中線明顯偏移。與C組比較，GM組、MHT組、GM+MHT組的腦水腫面積減小，中線輕微偏移，GM+MHT組腦水腫程度較輕。
　　6、腦組織一氧化氮（NO）和氧自由基中間產(chǎn)物丙二醛（MDA）：與S組NO含量0.091±0.013umol/mg和MDA含量0.55±0.17

10、nmol/mg相比，術(shù)后各組腦組織NO和MDA含量明顯升高，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與C組腦組織NO含量0.45±0.03和MDA含量2.68±0.36nmol/mg相比，GM組NO含量0.36±0.03和MDA含量2.19±0.26nmol/mg、MHT組NO含量0.33±0.03和MDA含量2.03±0.31nmol/mg、GM+MHT組NO含量0.29±0.02和MDA含量1.79±0.225nmol/mg的含量明顯降低，

11、并差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），GM+MHT組NO和MDA含量明顯降低（P<0.05）。
　　7、細(xì)胞色素C（CytC）：與S組相比，術(shù)后各組胞漿CytC的表達(dá)明顯增多，而線粒體的CytC表達(dá)明顯降低。與 C組相比，GM組、MHT組、GM+MHT組胞漿CytC表達(dá)降低，而線粒體內(nèi)CytC表達(dá)減少較少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　8、細(xì)胞凋亡蛋白Caspase-3：與S組相比，C組、GM組、MHT組、GM+

12、MHT組Caspase-3蛋白表達(dá)較明顯增多；與C組相比，GM組、MHT組、GM+MHT組蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.01），且GM+MHT組Caspase-3表達(dá)水平較GM組、MHT組減低明顯（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、神經(jīng)節(jié)苷脂（GM）和亞低溫（MHT）單獨或聯(lián)合應(yīng)用均可對重型顱腦創(chuàng)傷大鼠神經(jīng)起到保護(hù)作用，主要表現(xiàn)為改善其學(xué)習(xí)和記憶能力，降低其神經(jīng)功能缺陷評分，腦組織水腫以及血腦屏障通透性；
　　2、神經(jīng)