神經節(jié)苷脂對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后Nogo-A表達影響的研究.pdf

1、目的:
　　 圍產期窒息所致的新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemicencephalopathy，HIE)致死率及遺留后遺癥的幾率非常高，它嚴重的威脅了新生兒的生存質量。主要原因是:中樞神經受損后再生能力缺失，僅用對癥治療不能緩解其癥狀，亦不能降低其遺留后遺癥的可能性。舊觀點認為中樞神經受損后很難再生，而近期的研究表明:中樞神經的內環(huán)境中存在抑制神經再生的因子，嚴重影響了中樞神經的再生。根據目前國內外研究，不難發(fā)

2、現其中比較常見的中樞神經抑制因子有以下幾種:Nogo-A、髓磷脂相關糖蛋白(myelin-associatedglycoprotein，MAG)和少突膠質細胞—髓磷脂糖蛋白(oligodendrocyte-myelinglycoprotein，OMgp)，Nogo-A的英文全稱是Neuriteoutgrowthinhibitor-A，它是一種被人類基因RTN4編碼的蛋白，被認為是中樞神經系統(tǒng)神經突生長的特異性抑制劑。這幾種抑制因子共同抑

3、制了神經細胞的再生，它們經過相同的受體(Nogoreceptor，NgR)發(fā)揮作用，而Nogo-A在抑制受損神經中樞的作用更為強烈。
　　 該動物實驗研究旨在更為深入地探討新生兒缺氧缺血性腦病的治療。應用免疫組化方法、HE染色檢測新生大鼠大腦Nogo-A陽性細胞的數量以及觀察新生大鼠腦組織的病理情況;給予新生大鼠神經節(jié)甘脂(GM1)，嚴密觀察各個時間段、各組腦組織Nogo-A陽性細胞的數量及神經細胞的生長情況，探討Nogo-A在

4、新生大鼠HIBD腦損傷中的作用，觀察GM1對大鼠Nogo-A抑制腦細胞再生作用的影響及它是否可以保護因缺氧缺血而導致受損傷的神經細胞。
　　 方法:
　　 將90只7日齡新生大鼠隨機分為三組:對照組、HIBD組及GM1治療組。①對照組(n=30):僅游離左側頸總動脈，不結扎，不低氧，給予腹腔內注射生理鹽水0.25ml/kg。②HIBD組（生理鹽水組）(n=30):制備HIBD模型后即刻給予腹腔內注射生理鹽水0.25ml/

5、kg。視分組情況連用3天，③GM1治療組(n=30):制備HIBD模型后即刻給予腹腔內注射GM-120mg/kg/天，稀釋至0.5ml后腹腔內注射。視分組情況連用3天。以上各組均在12h、24h、72h三時間點采集標本，每組10只。各組動物分別處理后于12h、24h、72h時使其斷頭致死。將腦組織標本浸泡在30％蔗糖、40g/L多聚甲醛溶液中，待3天后，用石蠟固定，切片，通過HE染色觀察各組新生大鼠腦組織病理情況;用免疫組化的方法觀察N

6、ogo-A陽性細胞數量。
　　 結果:
　　 通過免疫組化的方法觀察對照組3個時段的新生大鼠腦組織Nogo-A陽性細胞數均隨著日齡的增長而略有增加;HIBD組:Nogo-A陽性細胞在造模24時即明顯升高，至72小時仍呈略微升高的趨勢;GM1組:Nogo-A的陽性細胞數早期逐漸升高，至24h時數量最多，之后開始減少，應用GM1后，缺氧缺血后Nogo-A的陽性細胞數量的增加較為延后。通過HE染色觀察:①12h時間點觀察:神經

7、細胞出現水腫，局部神經元出現核仁消失、核固縮現象②24h時間點觀察:神經元水腫，數量有所減少，核仁消失，核固縮;神經基質水腫。③72h時間點觀察:大腦皮質神經元數量明顯減少，正常結構消失，星形膠質細胞腫脹，出現腦實質壞死，膠質細胞增生。
　　 結論:
　　 Nogo-A在缺氧缺血性腦損傷后其陽性細胞數量顯著增高，抑制中樞神經損傷后的再生，神經節(jié)苷脂GM1在缺氧缺血性腦損傷后可部分抑制Nogo-A的表達，有穩(wěn)定細胞膜、減輕