不同處理對(duì)豬精子頂體酶抑制劑及其泛素化水平的影響.pdf

1、頂體酶是一種多功能蛋白，在繁殖過程中起著至關(guān)重要的作用。精子頂體酶抑制劑的主要作用是為防止過早的釋放精子頂體酶，損壞精子而采取行動(dòng)，以保護(hù)精子和精子運(yùn)輸過程中的雌性生殖道的上皮細(xì)胞。然而，成功受精的必要條件是有活性的頂體酶釋放，此過程需泛素-蛋白酶體途徑降解頂體酶抑制劑，從而頂體酶抑制作用被解除。泛素-蛋白酶體途徑是細(xì)胞內(nèi)一個(gè)重要的蛋白質(zhì)降解調(diào)節(jié)系統(tǒng)，是在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)依賴于ATP進(jìn)行的。其過程是靶蛋白首先以共價(jià)鍵形式聯(lián)結(jié)多個(gè)泛素分子

2、，形成靶蛋白多聚泛素鏈，即靶蛋白泛素，然后再被輸送到26s蛋白酶體中消化降解。
　　為了探究豬精子獲能后對(duì)精子頂體酶抑制劑表達(dá)量以及對(duì)頂體酶抑制泛素化程度的影響，低溫是否會(huì)使泛素-酶體通路受阻以及冷休克給頂體酶抑制劑帶來何種損傷。本實(shí)驗(yàn)利用SDS-PAGE、Western blot技術(shù)，闡明頂體酶抑制劑在鮮精、獲能、頂體反應(yīng)、冷休克各處理組中何時(shí)被降解以及冷休克給頂體酶抑制劑、泛素化程度帶來何種損傷，以探索精子冷凍損傷的機(jī)制。從而

3、，通過獲能與“獲能樣”精子生物學(xué)特性，探討它們各自發(fā)生的分子機(jī)制，以便有效的阻止、逆轉(zhuǎn)或延遲某些蛋白修飾途徑，以減少低溫?fù)p傷。為降低豬精子低溫?fù)p傷以及提高豬精子生育力提供理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。
　　結(jié)果表明：鮮精處理組比獲能、頂體反應(yīng)處理組的頂體酶抑制劑表達(dá)量要高；獲能和頂體反應(yīng)處理組的頂體酶抑制劑泛素化程度以及PSMD4亞基表達(dá)量均高于鮮精組；而冷休克處理組的頂體酶抑制劑出現(xiàn)不正常表達(dá)，頂體酶抑制劑泛素化程度和PSMD4亞基表達(dá)量

4、均下降。
　　結(jié)論如下：
　　1.頂體酶抑制劑在獲能或頂體反應(yīng)后發(fā)生泛素化。
　　2.獲能或頂體反應(yīng)后，頂體酶抑制劑結(jié)合4個(gè)泛素分子后，被泛素酶體系統(tǒng)完全降解，釋放游離泛素分子。
　　3.19s亞基PSMD4伴隨獲能、頂體反應(yīng)處理其表達(dá)量逐漸升高，獲能后26s蛋白酶體被激活，其表達(dá)量與頂體酶抑制劑變化趨勢相反。
　　4.冷休克處理后的精子的頂體酶抑制劑發(fā)生了不正常的表達(dá)并且其泛素程度和PSMD4亞基表達(dá)量嚴(yán)