不同毛色山羊皮膚組織ASIP蛋白表達(dá)與Agouti基因剪接體類型研究.pdf

1、利用蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blotting)對3只白色山羊、3只黑色山羊和3只棕色山羊皮膚組織Agouti基因所編碼ASIP蛋白表達(dá)量的差異進(jìn)行研究，結(jié)果顯示ASIP在不同毛色山羊皮膚組織中表達(dá)量為:白色山羊（0.94±0.19）＞棕色山羊（0.74±0.08）＞黑色山羊（0.57±0.18）。ASIP表達(dá)量在白色和黑色(P=0.03)山羊皮膚組織之間差異顯著，在白色和棕色(P=0.17)、棕色和黑色(P=0.21)山羊皮膚

2、組織之間差異不顯著。
　　已獲得的12847bp山羊Agouti基因序列與綿羊CH243-455O4反向互補(bǔ)序列進(jìn)行比對，二者相似性為97％。以綿羊CH243-455O4反向互補(bǔ)序列為模板設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增:利用7對引物擴(kuò)增CH243-455O4反向互補(bǔ)序列中102364-118525bp的位置，白色、黑色山羊擴(kuò)增獲得的序列長度分別為16161bp、16226bp，所得序列與12847bp的序列進(jìn)行拼接，分別得到長度為2779

3、3bp、27858bp的白色、黑色山羊Agouti基因的基因組序列;利用3對引物分別擴(kuò)增CH243-455O4反向互補(bǔ)序列中包括53571-53651、57572-57650、64870-64928這3段的序列，白色、黑色山羊獲得的包含此三段序列的長度分別為:364bp、2625bp、1296bp;367bp、2622bp、1298bp。Spidey軟件將綿羊mRNA(NM_001134303.1)與擴(kuò)增獲得的4段Agouti基因的基因

4、組序列進(jìn)行外顯子、內(nèi)含子預(yù)測，結(jié)果顯示:目前獲得的山羊Agouti基因5'非翻譯區(qū)序列有4段與綿羊mRNA序列相匹配，長度分別為:88bp、180bp、81bp、79bp。推測山羊Agouti基因5'非翻譯區(qū)可能由4個(gè)或更多不同長度不編碼蛋白質(zhì)的外顯子組成。
　　選用4只白色、3只黑色山羊皮膚組織，通過5'RACE實(shí)驗(yàn)對山羊mRNA進(jìn)行測序研究，得到:白色山羊(B2) Agouti基因5'非翻譯區(qū)外顯子1存在5種可變剪接形式，分別

5、為It、It'、IA、2C、IE;黑色山羊(H1、H2) Agouti基因5'非翻譯區(qū)外顯子1存在2種可變剪接形式，分別為It、It';不同類型剪接體的序列長度不同，白色、黑色山羊中It、It'均存在不同程度的缺失;根據(jù)不同毛色山羊所具有的不同剪接體類型推斷:IA、2C、IE可變剪接體可能是山羊白色形成的原因。白色山羊(B1)69-109bp這段序列在Agouti基因外顯子4上也檢測到，設(shè)計(jì)相應(yīng)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，驗(yàn)證得出白色山羊(B1