影響MP1和GMPR2基因在遼寧絨山羊皮膚中表達(dá)的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)旨在研究調(diào)控MP1與GMPR2基因在皮膚中表達(dá)的影響因素與機(jī)制，希望以此了解毛囊細(xì)胞的形成與周期發(fā)育，對(duì)進(jìn)一步選育遼寧絨山羊提供建設(shè)性意見及幫助。首先制備Noggin基因的RNA干擾載體并且感染羊皮膚傳代細(xì)胞，然后利用成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和類胰島素細(xì)胞生長(zhǎng)因子與褪黑激素既單獨(dú)又聯(lián)合處理羊皮膚細(xì)胞，最后通過(guò)Thermal Cycler DiceTM System Software計(jì)算分析出MP1和GMPR2基因的相對(duì)表達(dá)量。
　

2、　實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)慢病毒的最佳MOI值為30，并且需要添加polybrene助染劑增強(qiáng)感染效率。(2)成功構(gòu)建Lenti-Noggin-EGFP-miR慢病毒后，經(jīng)過(guò)計(jì)算滴度為1.35×106Tu/ml。(3) GMPR2基因在Noggin干擾組的相對(duì)表達(dá)量最低，而在陰性對(duì)照組中最高。(4)褪黑激素處理羊成纖維細(xì)胞結(jié)果顯示，MP1基因的表達(dá)被抑制，但隨著藥物處理時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制效果被削弱。(5) FGF5處理羊成纖維細(xì)胞時(shí)，MP1與

3、GMPR2基因在分時(shí)段表達(dá)差異非常顯著，其中24小時(shí)10-6g/L和48小時(shí)10-5g/L分別出現(xiàn)最大值。(6) IGF-1處理羊成纖維細(xì)胞，目的基因MP1隨著藥物處理時(shí)間延長(zhǎng)，濃度降低，基因表達(dá)的抑制程度逐漸降低，而GMPR2基因在10-4g/L72小時(shí)出現(xiàn)最大值。(7)協(xié)同實(shí)驗(yàn)證明褪黑激素與任何一種外源蛋白聯(lián)合使用均可以促進(jìn)兩種基因的表達(dá)，其中與FGF5協(xié)同作用效果更顯著。
　　結(jié)論:(1) BMP信號(hào)通路負(fù)調(diào)控GMPR2基因