重組人白介素1受體拮抗劑的臨床前免疫毒性研究.pdf

1、白介素1受體拮抗劑（Interleukin-1 receptor antagonist，IL-1Ra）為IL-1家族的一份子，能特異性的阻斷IL-1與IL-1R的結(jié)合，從而抑制IL-1的活性。我們的研究發(fā)現(xiàn)，重組人白介素-1受體拮抗劑（recombinant human Interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra）能有效的預(yù)防化療相關(guān)性腹瀉，對(duì)此我們進(jìn)行rhIL-1Ra新藥的臨床前和臨床研究。<

2、br>　　作為新的生物技術(shù)藥物，在進(jìn)入最終臨床試驗(yàn)和最終的批準(zhǔn)前，需要進(jìn)行非臨床藥物安全性評(píng)價(jià)。免疫毒性研究是生物技術(shù)藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)的一個(gè)重要內(nèi)容。在免疫毒性研究過程中，我們通過對(duì)豚鼠的全身主動(dòng)過敏實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)結(jié)果呈極強(qiáng)陽性，說明rhIL-1Ra對(duì)豚鼠有免疫毒性。通過對(duì)SD大鼠和食蟹猴重復(fù)給藥過程中抗rhIL-1Ra結(jié)合抗體和中和抗體的檢測(cè)觀察rhIL-1Ra的免疫原性。
　　采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme-link

3、ed immunosorbent assay，ELISA）測(cè)定血清中的抗rhIL-1Ra結(jié)合抗體。經(jīng)方法研究確定抗原的包被濃度10ug/ml，酶標(biāo)抗體的使用滴度為1：5000，陽性對(duì)照血清的工作濃度為1：10000，待測(cè)血清從1：100開始稀釋，血清經(jīng)過反復(fù)凍融三次后不影響測(cè)定。采用A375.S2細(xì)胞(人黑色素瘤細(xì)胞)體外殺傷實(shí)驗(yàn)測(cè)定血清中的抗rhIL-1Ra中和抗體。經(jīng)方法研究確定了方法的可行性，檢測(cè)時(shí)待測(cè)血清1：40后使用，當(dāng)對(duì)照血

4、清的rhIL-1Ra中和率在32.61％以內(nèi)時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果方有效，大鼠待檢血清中抗rhIL-1Ra中和抗體陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為中和率≥59.40%，食蟹猴為≥71.76%。SD大鼠肌肉注射給予rhIL-1Ra四周恢復(fù)期四周，劑量為0、5、15和30 mg/kg，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在劑量≥5 mg/kg下給藥兩周后可誘導(dǎo)產(chǎn)生結(jié)合抗體，給藥四周后誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。食蟹猴每天一次連續(xù)給藥4周，恢復(fù)期28天，劑量為0、2.5、7.5和15.0 mg/kg。