新型血小板受體拮抗劑A-,0-GDW的臨床前研究.pdf

1、20多年來的一系列研究表明，不穩(wěn)定性心絞痛和急性心肌梗塞都是由于冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂，使血小板黏附和聚集，導(dǎo)致血栓形成所致。位于纖維蛋白原上的精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸(RGD)序列是血小板表面糖蛋白Ⅱb/Ⅲa復(fù)合物的識別位點，兩者的結(jié)合是血小板聚集的最后共同通路。許多含RGD序列的小分子片段可阻斷這一最后通路，抑制血小板的聚集和血栓的形成。因此含RGD序列的多肽或化合物現(xiàn)已成為新藥開發(fā)的一個熱點。本課題組以RGD先導(dǎo)化合物為基礎(chǔ)，

2、根據(jù)RGD的構(gòu)效關(guān)系率先設(shè)計出(H2N(CH2)7-CO-Gly-Asp-Trp)(簡稱A0GDW)，現(xiàn)已獲得國家專利授權(quán)。本研究以國家一類新藥研究指導(dǎo)為原則，建立并優(yōu)化了原料藥的生產(chǎn)工藝路線和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，評價了A0GDW的穩(wěn)定性和可靠性，并對A0GDW的藥效學(xué)和毒理學(xué)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。本研究為AoGDW進(jìn)入臨床研究奠定了堅實的基礎(chǔ)。 采用Fmoc固相法合成A0GDW。以苯并三唑四甲基脲四氟硼酸鹽、二異丙基乙胺和1-羥基苯駢三

3、氮唑為縮合劑；苯酚-乙二硫醇-苯甲硫醚-水-三氟乙酸(2.5：5：5：5：82.5,V/V)為切割試劑，合成了A0GDW。經(jīng)ESI-MS檢測，驗證了合成產(chǎn)物的正確性。使用反向高效液相色譜對A0GDW進(jìn)行了分離純化，用色譜及ESI-MS進(jìn)行了純度檢測和結(jié)構(gòu)確證，A0GDW的純度為98.3％，結(jié)構(gòu)與理論相符。 建立了一種專屬性強、靈敏度高、分離效果好的高效液相色譜法來控制A0GDW原料藥中的有關(guān)物質(zhì)和含量。對A0GDW的外觀、熔點、

4、有關(guān)物質(zhì)及含量的變化穩(wěn)定性進(jìn)行了考察。采用比濁法測定A0GDW抑制家兔血小板聚集的作用，體外量效試驗結(jié)果表明，A0GDW200-12.5μmol/1對ADP、花生四稀酸和膠原誘導(dǎo)的兔血小板聚集有顯著的抑制作用，其作用強度與替羅非班(陽性對照藥)相當(dāng)；體內(nèi)時效試驗結(jié)果表明，A0GDW0.4mg/kg快速靜脈推注，對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有抑制作用，給藥后立即顯效，100min時藥效依然存在。在家兔的頸總動脈血栓模型中，靜脈注射A0GDW可

5、顯著減輕家兔動靜脈旁路的血栓濕重，劑量由0.1mg/kg增加至0.4mg/kg，其對血栓濕重的抑制率也由36.6％上升至76.0％，具有明顯的量效關(guān)系。采用FeCl3誘導(dǎo)大鼠頸總動脈血栓形成模型，組織學(xué)觀察表明單純血栓組管腔內(nèi)形成巨大血栓，假血栓組無一例血栓形成，A0GDW0.19、0.38和0.76mg/kg劑量組動物血栓內(nèi)均可見大量不等的血液隧道。采用小鼠斷尾法觀察A0GDW對出血時間的影響，結(jié)果表明A0GDW對小鼠出血時間有明顯延

6、長作用，但相同劑量下與替羅非班相比明顯減輕；血漿凝血功能檢測結(jié)果顯示A0GDW對血漿凝血功能無影響，各項指標(biāo)TT、PT、APTT均在正常范圍。 一般藥理學(xué)結(jié)果表明：A0GDW靜脈注射對動物的神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)無明顯影響。 急性毒性試驗結(jié)果顯示：小鼠最大耐受量大于20mg/kg；大鼠長期毒性試驗結(jié)果顯示：A0GDW76mg/kg和25mg/kg(分別為大鼠有效劑量的100倍和33倍)組各項檢測指標(biāo)與生理鹽水對照