MiR-181a通過靶向PRKCD調(diào)節(jié)宮頸癌放療敏感性.pdf

1、目的:研究不同放療敏感性的宮頸癌組織中的miRNA表達(dá)的區(qū)別,篩選出放療敏感相關(guān)的miRNA,并且研究miRNA調(diào)節(jié)放療敏感性的機(jī)制
　　材料和方法:假設(shè)miRNA能調(diào)節(jié)宮頸癌放療敏感性,使用miRNA芯片篩選出不同放療敏感性的宮頸癌的miRNA的表達(dá)。Real-timePCR驗證miRNA芯片篩選的結(jié)果。根據(jù)差異表達(dá)的倍數(shù)和P值,挑選出miR-181a作為課題主要研究的miRNA。選擇放療不敏感的宮頸癌細(xì)胞SiHa,放療敏感的宮

2、頸癌細(xì)胞Me180作為課題研究的細(xì)胞。miR-181a-mimic和miR-181a-inhibitor轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞后,克隆形成實驗檢測放療敏感性。用慢病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染miR-181a的穩(wěn)轉(zhuǎn)株,體外體內(nèi)實驗驗證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的放療敏感性。增殖實驗,周期實驗,凋亡實驗檢測miR-181a調(diào)節(jié)放療敏感性的可能機(jī)制。mRNA芯片和生物信息軟件預(yù)測miR-181a可能的靶基因。雙熒光素酶實驗驗證靶基因。Real-timePCR,western

3、blotting,克隆形成實驗驗證靶基因的表達(dá)和功能。
　　結(jié)果:我們采用miRNA芯片技術(shù)篩選11例放療敏感和7例放療抵抗的宮頸癌標(biāo)本中的miRNA表達(dá)譜,篩選出與放療敏感相關(guān)的miRNA。結(jié)果我們篩選出8個與放療敏感相關(guān)的miRNA。挑選miRNA-181a作為我們研究的對象。過表達(dá)miR-181a能抑制宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性,低表達(dá)miR-181a能促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性。我們建立表達(dá)miR-181a的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株種植于裸

4、鼠,體內(nèi)實驗驗證miR-181a能抑制宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性。通過mRNA芯片技術(shù)和生物信息軟件我們預(yù)測miR-181a的作用靶基因,PRKCD成為可能的靶基因。過表達(dá)miR-181a能抑制宮頸癌細(xì)胞的PRKCD的表達(dá),而低表達(dá)miR-181a能增加宮頸癌細(xì)胞的PRKCD的表達(dá)。抑制宮頸癌細(xì)胞PRKCD的表達(dá)能抑制宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性,并且促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的PRKCD的表達(dá)能增加宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性?；謴?fù)高表達(dá)miR-181a的宮頸癌