攜帶TIMP-3基因的重組腺病毒增加HPV陽性宮頸癌放療敏感性的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　 細(xì)胞對細(xì)胞外基質(zhì)成分（extracellular matrix，ECM）的降解是腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中最重要的分子事件，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases MMPs)是一類最重要的執(zhí)行ECM降解的水解酶，多種腫瘤組織中都伴有MMPs的高表達(dá)?；|(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(tissue inhibitors ofmetalloproteinase TIMPs)是一類能特異性抑制MM

2、Ps功能的活性因子，對抑制腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移有重要功能。TIMP-3是TIMPs家族的新成員，由于它誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制血管形成的作用，使其在腫瘤治療中越來越受到重視。
　　 宮頸癌發(fā)病率在全球婦女惡性腫瘤中居第二位。本實(shí)驗(yàn)室前期的有關(guān)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)Ad-TIMP-3可有效地治療宮頸癌：Ad-TIMP-3轉(zhuǎn)染可以強(qiáng)烈地誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞的凋亡，并存在顯著的旁觀者效應(yīng)；Ad-TIMP-3可引起CaSKi細(xì)胞的G2/M期阻滯；Ad-T

3、IMP-3和放療聯(lián)合使用可使療效明顯增強(qiáng)，起到效應(yīng)相加或協(xié)同作用；對裸鼠宮頸癌皮下移植瘤用Ad-TIMP-3單獨(dú)瘤體內(nèi)注射或與順鉑腹腔內(nèi)注射聯(lián)合使用均顯示明顯抑制腫瘤生長。
　　 基于上述研究結(jié)果，本研究著重于TIMP-3增加HPV陽性宮頸癌放療敏感性方面的探討。以腺病毒為載體，將TIMP-3基因?qū)際PV陽性宮頸癌細(xì)胞HeLa-Luc和CaSki，分析TIMP-3對宮頸癌細(xì)胞的作用以及與放療聯(lián)合應(yīng)用后的效果。
　　 方

4、法：
　　 應(yīng)用RT-PCR法及Western Blot法檢測HeLa-Luc和CaSki細(xì)胞感染Ad-TIMP-3前后TIMP-3 mRNA及蛋白表達(dá)水平；MTT法驗(yàn)證Ad-TIMP-3對HeLa-Luc和CaSki細(xì)胞增殖的抑制；平板克隆方法檢測Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合應(yīng)用后對細(xì)胞生長的影響；體外侵襲及粘附實(shí)驗(yàn)檢測Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合應(yīng)用后對細(xì)胞侵襲、粘附能力的影響；裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)了解Ad-TIMP-3與X射線

5、聯(lián)合應(yīng)用后HeLa-Luc細(xì)胞體內(nèi)致瘤性的變化。
　　 結(jié)果：
　　 RT-PCR和Western Blot證實(shí)TIMP-3在HeLa-Luc和CaSki兩種宮頸癌細(xì)胞系中均表達(dá)低下，而感染Ad-TIMP-3后TIMP-3表達(dá)水平明顯升高，Ad-TIMP-3感染HeLa-Luc和CaSki細(xì)胞前后TIMP-3的表達(dá)有明顯差異。MTT結(jié)果顯示Ad-TIMP-3能夠明顯抑制HeLa-Luc和CaSki細(xì)胞增殖，且具有劑量效應(yīng)

6、關(guān)系。平板克隆方法顯示Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合應(yīng)用可顯著減少平板克隆形成數(shù)。體外侵襲及粘附實(shí)驗(yàn)顯示Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合應(yīng)用后顯著減弱宮頸癌細(xì)胞的侵襲能力及粘附性。裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合組HeLa-Luc細(xì)胞的體內(nèi)致瘤性顯著下降。
　　 結(jié)論：
　　 Ad-TIMP-3抑制宮頸癌細(xì)胞增殖。與X射線聯(lián)合應(yīng)用后，Ad-TIMP-3顯著提高宮頸癌細(xì)胞放療敏感性，抑制放療誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長，