共脅迫下玉米幼苗microRNA文庫的分析與驗證.pdf

1、干旱、鹽和堿等非生物脅迫對植物的生長、發(fā)育和產(chǎn)量影響很大。玉米(Zea mays L.)是一種重要的作物，目前對于玉米非生物脅迫的研究集中在單一脅迫，多個脅迫共處理的情況很少。microRNA(miRNA)是一種廣泛存在于植物中的非編碼小RNA，在非生物脅迫中扮演著重要的角色。對于干旱、鹽和堿共脅迫下玉米幼苗miRNA的研究目前還沒有報道。因此，本研究構(gòu)建2個miRNA文庫，篩選得到對干旱、鹽和堿共脅迫有顯著響應(yīng)的miRNA，通過進(jìn)一步

2、分析和驗證，了解這些miRNA的功能。
　　對miRNA文庫的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，共得到31個miRNA家族的112個已知miRNA和10個新miRNA，其中58個miRNA表達(dá)差異顯著，17個miRNA上調(diào)表達(dá)，41個miRNA下調(diào)表達(dá)。對所有miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測，共得到2224條靶基因。
　　使用geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件對11個玉米候選內(nèi)參基因進(jìn)行穩(wěn)定性分析，發(fā)現(xiàn)microRNA總體比其

3、他候選內(nèi)參基因穩(wěn)定，選擇相對穩(wěn)定的zma-miR172和zma-miR171a為內(nèi)參基因進(jìn)行后續(xù)研究。隨機(jī)挑選11個miRNA進(jìn)行qRT-PCR的驗證，發(fā)現(xiàn)除novel8與建庫結(jié)果不相符外，其余miRNA與文庫中的表達(dá)趨勢均一致。對上述11個miRNA中的9個已知miRNA進(jìn)行靶基因qRT-PCR的分析，發(fā)現(xiàn)在不同組織中，地下組織中的多數(shù)miRNA的響應(yīng)程度大于地上組織;在不同處理程度中miRNA有隨處理強度加大響應(yīng)加大的趨勢;靶基因?qū)?/p>