CIK對地西他濱增敏乳腺癌MDA-MB-231細胞的殺傷機制探討.pdf

1、背景與目的：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤。目前研究認為表觀遺傳學的改變如甲基化,乙酰化等與原發(fā)性乳腺癌中發(fā)生的密切相關。近年來,生物治療如CIK等在臨床腫瘤的治療中取得了一定的效果,然而仍然有眾多的乳腺癌患者對生物治療不敏感而導致腫瘤的復發(fā)或轉移。如何安全,有效的提高乳腺癌患者的生存質量,延長生存期,則成為生物治療的研究的熱點。因此,通過逆轉異常表觀遺傳學改變,去甲基化藥物與生物治療聯(lián)合使用,可能是乳腺癌患者治療的新靶點。為此我們探討去

2、甲基化藥物地西他濱單獨或聯(lián)合TRAIL對乳腺癌MDA-MB-231細胞及正常乳腺MCF-10A細胞的增殖和凋亡的影響,檢測體外培養(yǎng)CIK細胞的表型,并觀察地西他濱是否協(xié)同CIK對腫瘤細胞殺傷及對正常乳腺細胞的影響。
　　方法：應用MTT方法檢測不同濃度的地西他濱應用24,48h及TRAIL應用24h對乳腺癌MDA-MB-231細胞及正常乳腺MCF-10A細胞的增殖影響;并采用流式細胞儀檢測TRAIL單獨或聯(lián)合地西他濱處理乳腺癌MD

3、A-MB-231細胞及MCF-10A細胞24h后對細胞凋亡的影響。從3個健康的志愿者中抽取20ml的外周血,分離PBMCs,經(jīng)加入RPMI1640,10％胎牛血清,30ng/mL IL-2,10 ng/mL IL-15單抗,在37℃5%CO2培養(yǎng),每2天半量換液,培養(yǎng)5天后流式細胞儀檢測CIK細胞表型。經(jīng)LDH釋放法檢測不同效靶比的CIK單獨或聯(lián)合50μmol/L的DAC作用24后對乳腺癌MDA-MB-231細胞及MCF-10A細胞的殺

4、傷率。
　　結果：DAC對MDA-MB-231有輕微的細胞增殖抑制作用,對正常乳腺上皮MCF-10A無明顯的作用。MDA-MB-231細胞在不同濃度的TRAIL作用濃度下,24h的IC50為100 ng/mL,然而TRAIL對MCF-10A無殺傷效應。MDA-MB-231細胞經(jīng)0.05、0.5、5、50μmol/L的DAC預處理24 h,聯(lián)合100ng/mL TRAIL作用24 h的凋亡率與單獨100ng/mL TRAIL組比較差

5、異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或<0.01),且與DAC呈劑量依賴性(P<0.05)。正常乳腺上皮細胞MCF-10A無明顯凋亡產生。體外培養(yǎng)5天的CIK細胞中CD3+CD56+的NKT細胞為36.24%±3.45%,TRAIL的表達率為28.9%±9.7%。MDA-MB-231經(jīng)DAC預處理24 h后,5:1、10:1、20:1效靶比的CIK對MDA-MB-231的殺傷率分別為18.6%±2.6%、26.3%±4.5%、51.6%±6.6