低氧誘導(dǎo)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞遷移及其作用機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌已成為女性發(fā)病率最高的癌癥，其中“三陰性”乳腺癌因極易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，是乳腺癌預(yù)后不良或死亡的關(guān)鍵和核心。細(xì)胞遷移作為轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟已成為了研究腫瘤轉(zhuǎn)移的重要方法。研究表明，惡性腫瘤細(xì)胞遷移能力的大小受腫瘤低氧微環(huán)境的影響，并與低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α的穩(wěn)定性和粘附分子vimentin表達(dá)上調(diào)密切相關(guān)。腫瘤低微環(huán)境中存在持續(xù)低氧和間歇低氧兩種低氧環(huán)境，它們以不同方式影響著腫瘤。然而，目前低氧在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用仍具爭(zhēng)議性，并且不同的低

2、氧環(huán)境是如何誘導(dǎo)HIF-1α和vimentin表達(dá)，促進(jìn)“三陰性”乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不清楚。本文通過構(gòu)建不同的低氧細(xì)胞模型，比較其對(duì)“三陰性”乳腺癌遷移的影響，為探索“三陰性”乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制和抗轉(zhuǎn)移治療提供新的思路。
　　目的:
　　1.明確不同的低氧環(huán)境對(duì)人“三陰性”乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231遷移與增殖的影響；
　　2.明確不同低氧環(huán)境下，MDA-MB-231細(xì)胞HIF-1α和vimentin表達(dá)情況；

3、r>　　3.探討間歇低氧環(huán)境下MDA-MB-231細(xì)胞的遷移機(jī)制。
　　方法:
　　構(gòu)建常氧、持續(xù)低氧、間歇低氧三種細(xì)胞模型；采用劃痕實(shí)驗(yàn)和 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)比較人“三陰性”乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株在三種細(xì)胞模型中的遷移水平；CCK8法評(píng)估細(xì)胞增殖在遷移實(shí)驗(yàn)中的作用；RT-QPCR和western blot分別檢測(cè)HIF-1α和vimentin在不同低氧細(xì)胞模型中的mRNA和蛋白表達(dá)水平；在此基礎(chǔ)上結(jié)合

4、siHIF-1α干擾HIF-1α表達(dá)，探索低氧環(huán)境下細(xì)胞的遷移機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.間歇低氧對(duì)細(xì)胞遷移的影響與循環(huán)數(shù)有關(guān)，在10循環(huán)時(shí)細(xì)胞的遷移率最高，且顯著高于持續(xù)低氧和常氧組；
　　2.間歇低氧抑制細(xì)胞增殖，持續(xù)低氧在低氧48小時(shí)后其增值抑制效應(yīng)才較為明顯，且隨時(shí)間的延長(zhǎng)抑制作用更明顯；
　　3.遷移實(shí)驗(yàn)48小時(shí)內(nèi)，間歇低氧10循環(huán)細(xì)胞的HIF-1α蛋白有效積累量高于持續(xù)低氧細(xì)胞；
　　4. HI

5、F-1α mRNA在間歇低氧組細(xì)胞和持續(xù)低氧組細(xì)胞中表達(dá)無(wú)明顯差異，但HIF-1αmRNA在間歇低氧復(fù)氧階段顯著高于相應(yīng)低氧階段；
　　5.間歇性低氧細(xì)胞的Vimentin蛋白呈恒定高表達(dá)，而持續(xù)低氧細(xì)胞的Vimentin蛋白表達(dá)不穩(wěn)定；
　　6. Vimentin mRNA在間歇低氧組細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于持續(xù)低氧組細(xì)胞；
　　7. SiRNA干擾間歇低氧細(xì)胞的HIF-1α表達(dá)后，其Vimentin蛋白下調(diào)，細(xì)胞遷移能