TRAIL聯(lián)合白藜蘆醇對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 乳腺癌是危害我國(guó)婦女健康最主要的惡性腫瘤之一。主要治療方法包括手術(shù)、化療、放療、內(nèi)分泌治療等,但各有局限性,特別是放、化療對(duì)正常細(xì)胞具有毒性作用。因此,尋找一種有效殺傷乳腺癌細(xì)胞而毒副作用小的新方法是當(dāng)前亟待解決的課題。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-inducingligand,TRAIL)是與細(xì)胞死亡密切相關(guān)的腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,T

2、NF)超家族成員,能與死亡受體(death receptor,DR)DR4和DR5結(jié)合,特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,對(duì)正常細(xì)胞的毒性作用卻很小,因而成為應(yīng)用前景廣泛的抗腫瘤制劑。白藜蘆醇是一種多酚類(lèi)天然化合物,葡萄皮和紅酒中含量尤為豐富,不但具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抑制血小板聚集、保護(hù)心血管、抗炎、抗氧化等多種生物學(xué)活性和藥理作用,而且具有顯著的抑制腫瘤的作用。本研究將TRAIL與白藜蘆醇聯(lián)合,觀察對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231增殖及凋亡的

3、影響及機(jī)制,為探索治療乳腺癌的新方法提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 分別將不同濃度的TRAIL及白藜蘆醇單獨(dú)或聯(lián)合作用于體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231。應(yīng)用MTT法及軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制。DAPI染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面TRAIL受體DR4和DR5蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、TRAIL

4、聯(lián)合白藜蘆醇協(xié)同抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的生長(zhǎng):
　　 25、50、100、200μmol/L白藜蘆醇作用12h,對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖的抑制率分別為24.22％±1.66％、30.79％±1.60％、45.72％±1.25％和53.31％±1.94％；50、100、200ng/ml TRAIL作用12h,細(xì)胞增殖抑制率為13.69％±3.24％、45.99％±1.37％和61.29％±3.41％；與對(duì)照組比

5、較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。50ng/ml TRAIL分別與50、100μmol/L白藜蘆醇聯(lián)合應(yīng)用后,增殖抑制率分別增至62.43％±2.07％和87.32％±1.44％,與單獨(dú)應(yīng)用相應(yīng)濃度的TRAIL及白藜蘆醇比較,差異顯著(P<0.01)。聯(lián)合組中,100μmol/L白藜蘆醇組與較50μmol/L白藜蘆醇組差異顯著(P<0.01)。
　　 軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)中,對(duì)照組集落形成率為7.17％±0.49％；50ng/m

6、l TRAIL組集落形成率為5.95％±0.05％；50、100μmol/L白藜蘆醇組集落形成率為4.55％±0.08％和3.75％±0.09％；與對(duì)照組比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。50ng/mlTRAIL與50、100μmol/L白藜蘆醇聯(lián)合應(yīng)用,集落形成率分別為2.49％±0.08％和1.38％±0.07％,與單獨(dú)應(yīng)用相應(yīng)濃度的TRAIL和白藜蘆醇比較,差異顯著(P<0.01)。聯(lián)合組中,100μmol/L白藜蘆醇組較50

7、μmol/L白藜蘆醇組差異顯著(P<0.01)。
　　 2、TRAIL聯(lián)合白藜蘆醇協(xié)同誘導(dǎo)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的凋亡:
　　 經(jīng)DAPI染色,對(duì)照組細(xì)胞胞核完整,呈橢圓形,胞核內(nèi)染色質(zhì)均勻分布；TRAIL和白藜蘆醇單獨(dú)處理后,部分胞核染色質(zhì)凝聚、邊集；TRAIL與白藜蘆醇聯(lián)合作用后,多數(shù)胞核皺縮,染色質(zhì)凝聚、邊集,熒光強(qiáng)度明顯增加,并出現(xiàn)胞核碎裂等晚期凋亡的典型形態(tài)學(xué)改變。
　　 50、100、200

8、μmol/L白藜蘆醇處理后細(xì)胞凋亡率分別為28.80％±1.34％、38.78％±1.19％和58.96％±1.26％:50、100、200ng/ml TRAIL處理后,細(xì)胞凋亡率分別為15.94％±0.34％、42.62％±0.99％和76.30％±2.80％；與對(duì)照組(凋亡率為3.53％±0.25％)比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。50ng/ml TRAIL與50、100μmol/L白藜蘆醇聯(lián)合應(yīng)用后,凋亡率分別增加至53.5

9、9％±1.44％和73.72％±1.96％,與單獨(dú)應(yīng)用相應(yīng)濃度的TRAIL及白藜蘆醇比較,差異顯著(P<0.01)。聯(lián)合組中,100μmol/L白藜蘆醇組較50μmol/L白藜蘆醇組差異顯著(P<0.01)。
　　 3、白藜蘆醇上調(diào)DR4、DR5在細(xì)胞膜表面的表達(dá):
　　 對(duì)照組細(xì)胞表面表達(dá)DR4、DR5,熒光指數(shù)(FI)分別1.52±0.04和1.61±0.13。50、100、200μmol/L白藜蘆醇作用后,DR4的

10、FI值分別為1.80±0.07、2.11±0.14和2.59±=0.16,與對(duì)照組比較差異顯著(P<0.01),組間比較差異顯著(P<0.01)；DR5的FI值分別為2.16±0.08、2.92±0.25和3.90±0.06,與對(duì)照組比較差異顯著(P<0.01),組間比較差異顯著(P<0.01)。而50、100、200ng/ml TRAIL組DR4及DR5的FI值較相應(yīng)的對(duì)照組均沒(méi)有差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：