ICBP90表達(dá)及其對(duì)膽囊癌細(xì)胞化療敏感性影響的研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)生長(zhǎng)抑素作用后膽囊癌細(xì)胞內(nèi)ICBP90蛋白表達(dá)的變化，探討生長(zhǎng)抑素增強(qiáng)膽囊癌細(xì)胞對(duì)阿霉素化療敏感性的分子機(jī)制。 方法：（1）選取人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD，常規(guī)體外培養(yǎng)，并驗(yàn)證其成瘤性及病理組織類型；GBC-SD細(xì)胞分為4組：?jiǎn)为?dú)生長(zhǎng)抑素作用組、單獨(dú)阿霉素作用組、聯(lián)合用藥組（生長(zhǎng)抑素預(yù)處理24h后，再加入阿霉素）和對(duì)照組。（2）在藥物作用24h，48h，72h和96h后，采用MTT方法檢測(cè)各組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。（3）在

2、藥物作用24，36，48和60h后，采用Annexin V/PI方法分別檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況；（4）在生長(zhǎng)抑素作用12、24、36和48h后，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)GBC-SD細(xì)胞內(nèi)DNA的含量，確定各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞所處周期。（5）采用western blot 方法檢測(cè)在生長(zhǎng)抑素作用12、24、36和48h后GBC-SD細(xì)胞內(nèi)Rb、E2F-1、ICBP90和Topoisomerase Ⅱα各蛋白的表達(dá)變化，以及在生長(zhǎng)抑素作用24后GBC-SD

3、細(xì)胞內(nèi)P53和Bax蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果：（1）GBC-SD細(xì)胞在體外常規(guī)培養(yǎng)，生長(zhǎng)旺盛；裸鼠接種4周后可見(jiàn)明顯荷瘤，病理切片鏡下見(jiàn)腺癌組。（2）對(duì)GBC-SD細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用生長(zhǎng)抑素和阿霉素，可明顯抑制膽囊癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，并呈現(xiàn)濃度-效應(yīng)依賴關(guān)系，對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用明顯強(qiáng)于單用阿霉素組（P<0.05）。（3）聯(lián)合用藥組和單獨(dú)阿霉素作用組出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡（P<0.05），而且細(xì)胞凋亡具有時(shí)間依賴性的，其中聯(lián)合用藥組的細(xì)胞凋亡更顯著

4、（P<0.05）；而單獨(dú)生長(zhǎng)抑素組卻沒(méi)有出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡（P>0.05）。（4）在生長(zhǎng)抑素作用后，GBC-SD細(xì)胞出現(xiàn)明顯的S期阻滯（P<0.05），并且S期細(xì)胞比例在24h達(dá)到高峰，隨后逐漸降低。（5）生長(zhǎng)抑素作用12h、24h和36h后，各蛋白表達(dá)變化情況如下：Rb和E2F-1蛋白表達(dá)增多，在12h達(dá)到高峰（P<0.05）；ICBP90蛋白的表達(dá)增多，在24h達(dá)到高峰（P<0.05）；而Topoisomerase Ⅱα蛋白的表達(dá)也

5、增多，在24h達(dá)到高峰，隨后保持一平臺(tái)（P<0.05）。另外，生長(zhǎng)抑素作用24h后，P53和Bax蛋白的表達(dá)無(wú)明顯變化（P>0.05）。 結(jié)論：生長(zhǎng)抑素增強(qiáng)阿霉素對(duì)膽囊癌細(xì)胞的殺傷作用，并非是由生長(zhǎng)抑素與阿霉素本身的細(xì)胞毒性作用疊加所致，而與生長(zhǎng)抑素影響膽囊癌細(xì)胞的周期和細(xì)胞內(nèi)Topoisomerase Ⅱα蛋白的表達(dá)有關(guān)。生長(zhǎng)抑素誘導(dǎo)膽囊癌細(xì)胞發(fā)生S期阻滯，可能與其改變細(xì)胞內(nèi)Rb、E2F-1蛋白的表達(dá)有關(guān)；而Topoisome