糖類物質(zhì)的HPLC柱前衍生化新方法研究及其MALDI-TOF-MS分析.pdf

1、高效液相色譜(HPLC)已經(jīng)成為糖類物質(zhì)分析的重要工具，但由于糖類物質(zhì)沒有紫外或熒光吸收，需對樣品進行柱前衍生使它帶上紫外或熒光基團，從而可通過紫外或熒光檢測器對其進行檢測。由于已有的各種衍生試劑都有衍生反應(yīng)難控制或質(zhì)譜檢測靈敏度不高的等局限性，不能很好地滿足當前糖生物學(xué)分析的需要。因此，繼續(xù)研究開發(fā)新的高靈敏衍生化試劑及方法有著重要意義。 本論文重點研究了一種新型糖類物質(zhì)柱前衍生化方法，首次以3-氨基-9-乙基咔唑作為衍生化試

2、劑對糖類物質(zhì)進行柱前衍生化HPLC分離和MALDI-TOF-MS分析。對反應(yīng)條件和色譜條件進行了優(yōu)化，對方法進行了考察，并用該衍生化方法對不同生物樣品進行了分析，取得了很好的效果。本研究主要取得了以下的研究成果和結(jié)論： 1.首次將AEC試劑用于標準單糖的柱前衍生化，利用HPLC和MALDI-TOF-MS分析對反應(yīng)結(jié)果進行檢測和分析。對反應(yīng)條件進行了優(yōu)化，并考察了方法的穩(wěn)定性、靈敏度、檢測限等。結(jié)果顯示：衍生化方法反應(yīng)條件溫和(7

3、0℃反應(yīng)60 min)，衍生物不用脫鹽處理即可直接進行質(zhì)譜分析，檢測靈敏度高，避免了微量樣品的損失。 2.對色譜條件進行優(yōu)化，建立了理想的單糖分析模式，并將此方法成功應(yīng)用于三種螺旋藻多糖的單糖組成分析。 3.對色譜分離條件進行優(yōu)化，建立了寡糖鏈分析的HPIC分離和MALDI-TOF-MS分析方法。將該方法應(yīng)用于殼寡糖生物樣品的分析，首次實現(xiàn)了殼寡糖混合物的柱前衍生HPLC和MALDI-TOF-MS分析，較好的分析了殼寡糖