生物活性物質(zhì)的分離分析新方法研究.pdf

1、生物活性物質(zhì)的分離分析在現(xiàn)代分析科學(xué)中已顯出越來(lái)越重要的作用，并廣泛用于食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)、臨床檢驗(yàn)、藥物分析、醫(yī)藥衛(wèi)生和質(zhì)量控制等諸多領(lǐng)域。在這些領(lǐng)域中通常需要對(duì)復(fù)雜體系中的一種或多種組分進(jìn)行分離分析，如中藥分析中的某些有效成分的濃度測(cè)定、臨床診斷中對(duì)疾病相關(guān)標(biāo)志物的檢測(cè)、食品分析中對(duì)牛奶中三聚氰胺的檢出等。這就使得簡(jiǎn)便、快速、靈敏、低成本的分離分析方法顯得尤為重要。本研究就建立生物活性物質(zhì)的分離分析方法開(kāi)展了以下幾方面的工作：

2、 1.高效液相色譜-程序波長(zhǎng)設(shè)計(jì)紫外檢測(cè)法用于同時(shí)測(cè)定血漿色氨酸和犬尿氨酸及其應(yīng)用研究。 本研究通過(guò)高效液相色譜-程序波長(zhǎng)設(shè)置紫外檢測(cè)建立了血漿色氨酸和犬尿氨酸的同時(shí)測(cè)定方法，該方法具有簡(jiǎn)單，快速，靈敏，特異等優(yōu)點(diǎn)。在Agilent Hypersil ODS（125 mm×4.0 mm，5μm）柱上6分鐘內(nèi)即可完成血漿色氨酸和犬尿氨酸兩種組分的同時(shí)分離測(cè)定。流出液通過(guò)紫外檢測(cè)器程序波長(zhǎng)設(shè)計(jì)檢測(cè)，0到4分鐘波長(zhǎng)設(shè)置為360 nm

3、以檢測(cè)犬尿氨酸，4到6分鐘波長(zhǎng)設(shè)置為278 nm以檢測(cè)色氨酸，這樣可實(shí)現(xiàn)這兩種組分在一次流動(dòng)過(guò)程中的同時(shí)檢測(cè)。該方法測(cè)定犬尿氨酸的線性范圍是0.269到21.20μmol/L，色氨酸的線性范圍是3.35到678.0μmol/L。犬尿氨酸和色氨酸的檢出限分別是0.028μmol/L和0.053μmol/L。精密度和回收率都符合臨床檢驗(yàn)要求。該方法被用于分析川崎病、過(guò)敏性紫癜、腎病綜合征、急性腎炎兒童患者的血漿色氨酸和犬尿氨酸濃度。結(jié)果顯示

4、川崎病組各指標(biāo)和對(duì)照組間有顯著性差異，其它組疾病與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。 2.功能化超順磁性磁珠用于腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)。 利用超順磁性磁珠，結(jié)合以絲網(wǎng)印刷電極（SPCE）為工作電極的電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)，提出一種新型的利用磁場(chǎng)固定生物組分的免疫傳感器，用于腫瘤標(biāo)志物CA199的分離檢測(cè)。該傳感器是通過(guò)在環(huán)氧基末端修飾的超順磁性納米磁珠表面結(jié)合上鏈酶親和素，利用鏈酶親和素和生物素反應(yīng)，將生物素標(biāo)記的抗體連接在磁珠表面，再加入經(jīng)離線溫育

5、的樣品和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體（HRP-anti-CA199），這樣酶標(biāo)抗體被成功連接在超順磁性磁珠表面，通過(guò)磁場(chǎng)將其固定在SPCE表面，加入鄰苯二胺-過(guò)氧化氫體系進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)。電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)與CA199抗原濃度成正比，線性范圍為5.0～120 U/mL。該方法無(wú)需固定化試劑，具有簡(jiǎn)單、靈敏、低成本等特點(diǎn)。 3.微流控芯片電化學(xué)檢測(cè)在免疫分析中的應(yīng)用。 隨著分析化學(xué)、生物學(xué)、電子學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)和微加工技術(shù)的迅速發(fā)展，

6、新的分析儀器和方法不斷被應(yīng)用于檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，使檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)也相應(yīng)地得到了快速發(fā)展。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)已逐步提出向即時(shí)檢驗(yàn)（point-of-caretesting，POCT）、家庭檢測(cè)或野外檢測(cè)方向發(fā)展，以實(shí)現(xiàn)標(biāo)本的快速方便的檢測(cè)。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的微流控免疫分析在儀器的微型化和便攜化方面具有較好的應(yīng)用前景，使實(shí)現(xiàn)POCT的目標(biāo)成為可能。微流控免疫分析是通過(guò)微加工技術(shù)在芯片材料上構(gòu)建出微米級(jí)的通道用于免疫分析。微流控免疫分析因其獨(dú)特的性質(zhì)，能大大改善常規(guī)免

7、疫分析性能：（1）由于微通道結(jié)構(gòu)較大的比表面積，能使免疫反應(yīng)大大縮短，提高分析效率。微流控芯片分析多在幾秒或幾十秒時(shí)間內(nèi)就能完成組分的分離檢測(cè)。（2）由于通道的尺寸小，能大大節(jié)約貴重的免疫試劑消耗量，降低檢測(cè)成本。微流控分析的進(jìn)樣量已降低至納升級(jí)甚至更低的水平。（3）易于實(shí)現(xiàn)儀器便攜化，微型化和操作自動(dòng)化，有望用于POCT。本研究通過(guò)微流控通道中的免疫反應(yīng)，將印刷電極整合在芯片上實(shí)現(xiàn)微流控芯片免疫分析電化學(xué)檢測(cè)一體化裝置用于腫瘤標(biāo)志物含