人參皂苷Rb1對(duì)癲癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡和β-catenin蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討人參皂苷Rb1對(duì)青霉素誘導(dǎo)癲癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡和β-catenin蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只(體重250±50g)，隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照(BC)組(n=6)、人參皂苷Rb1對(duì)照(GC)組(n=8)、青霉素致癇(PE)組(n=8)和人參皂苷Rb1干預(yù)致癇(GPE)組(n=8)。人參皂苷Rb1對(duì)照組和人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組大鼠在模型制備前1h腹腔注射1％人參皂苷Rb1

2、注射液3ml/Kg(30mg/Kg)，空白對(duì)照組和青霉素致癇組大鼠則腹腔注射等劑量生理鹽水。大鼠癲癇模型的制備采用腹腔注射青霉素760萬U/Kg的方法，即青霉素致癇組和人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組大鼠腹腔注射80萬U/ml青霉素注射液9.5 ml/Kg，空白對(duì)照組和人參皂苷Rb1對(duì)照組大鼠則腹腔注射等劑量的生理鹽水。模型制備后觀察大鼠行為學(xué)改變，并記錄癲癇發(fā)作等級(jí)。模型制備后3h時(shí)，各組大鼠腹腔注射3％戊巴比妥鈉1 ml/Kg麻醉，開胸暴露

3、心臟，剪開右心房，將穿刺針經(jīng)左心室刺入升主動(dòng)脈，用生理鹽水快速灌注沖洗，然后用4％多聚甲醛500ml灌注固定，開顱，取出腦組織浸泡于4％多聚甲醛8～12h后固定。常規(guī)酒精脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片（厚度4μm）。蘇木精-伊紅染色法（HE）染色，光鏡下觀察海馬神經(jīng)元組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化;脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記（TUNEL）法測(cè)海馬神經(jīng)元凋亡;免疫組化法測(cè)海馬神經(jīng)元β-catenin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)大鼠癲

4、癇發(fā)作的行為學(xué)改變:空白對(duì)照組和人參皂苷Rb1對(duì)照組大鼠無癇樣發(fā)作表現(xiàn);青霉素致癇組大鼠癲癇發(fā)作明顯，發(fā)作等級(jí)達(dá)Ⅲ級(jí)及以上，其中Ⅲ級(jí)3只(3/8)，Ⅳ級(jí)2只(2/8)，Ⅴ級(jí)3只(3/8);人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組大鼠癲癇發(fā)作程度較青霉素致癇組明顯減輕，發(fā)作等級(jí)僅為Ⅰ-Ⅱ級(jí)，其中Ⅰ級(jí)3只(3/8)，Ⅱ級(jí)5只(5/8)。(2)海馬神經(jīng)元組織結(jié)構(gòu)改變:空白對(duì)照組和人參皂苷Rb1對(duì)照組大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)正常;青霉素致癇組和人參皂苷Rb1干預(yù)

5、致癇組大鼠海馬神經(jīng)元出現(xiàn)變性和壞死損傷，但后者損傷程度較輕。(3)海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡變化:各組大鼠海馬CA1、CA2、CA3和齒狀回區(qū)均有神經(jīng)元凋亡?？瞻讓?duì)照組、人參皂苷Rb1對(duì)照組、青霉素致癇組和人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組大鼠海馬CA1區(qū)凋亡神經(jīng)元計(jì)數(shù)（個(gè)）分別是2.5±1.05、1.75±0.71、3.5±0.93和1.63±0.74; CA2區(qū)凋亡神經(jīng)元計(jì)數(shù)分別是3.33±1.03、1.50±0.76、6.13±1.23、2.75±

6、0.71;CA3區(qū)凋亡神經(jīng)元計(jì)數(shù)分別是3.83±1.17、3.75±0.71、8.38±1.3、5.38±1.19;齒狀回凋亡神經(jīng)元計(jì)數(shù)分別是3.5±1.38、3.38±0.92、21.75±3.85、10.88±3.36。與空白對(duì)照組相比，青霉素致癇組和人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組大鼠海馬區(qū)凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與青霉素致癇組比較，人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組海馬區(qū)凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少（P＜0.05）。

7、與人參皂苷Rb1對(duì)照組比較，人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組海馬區(qū)凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增高（P＜0.05）。(4)海馬神經(jīng)元β-catenin蛋白表達(dá)變化:空白對(duì)照組、人參皂苷Rb1對(duì)照組、青霉素致癇組和人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組大鼠海馬β-catenin蛋白表達(dá)OD值的平均值(AO)分別是(16.94±0.17)×10-2、(20.39±2.64)×10-2、(18.79±0.67)×10-2和(17.07±0.5)×10-2。與空白對(duì)照組相比，

8、人參皂苷Rb1對(duì)照組和青霉素致癇組β-catenin蛋白陽(yáng)性表達(dá)高于空白對(duì)照組(P＜0.05);與青霉素致癇組相比，人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組β-catenin蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯減低(P＜0.05);與人參皂苷Rb1對(duì)照組比較，人參皂苷Rb1干預(yù)致癇組β-catenin蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯減低(P＜0.05)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:青霉素誘導(dǎo)癲癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡增加和β-catenin蛋白表達(dá)升高;人參皂苷Rb1能夠減輕青霉