不同質量精子線粒體DNA拷貝數(shù)及完整性的比較研究.pdf

1、【背景】目前全世界有10％-15%的夫婦受到不孕不育的困擾,其中40%-50%是由于男方因素引起,全球范圍男子生殖能力呈明顯下降趨勢。導致男性不育的病因十分復雜,生育相關基因的缺陷是重要原因之一。線粒體是精子中唯一的細胞器,經(jīng)典的理論認為線粒體通過氧化磷酸化產(chǎn)生三磷酸腺苷( adenosine triphosphate,ATP)供給精子能量。雖然線粒體產(chǎn)能對精子運動和功能的重要性還存爭議,但在異常精液中確實發(fā)現(xiàn)了精子線粒體DNA(mit

2、ochondrial DNA,mtDNA)的突變、缺失及精子結構的異常。近年來,關于精子mtDNA的研究引起人們的廣泛關注,但研究主要集中在基因的突變與缺失上,拷貝數(shù)的研究較少,不過也有學者提出可以通過測定mtDNA的拷貝數(shù)評估線粒體的功能狀態(tài)。
　　【目的】本研究的目的是通過比較不同質量精子mtDNA拷貝數(shù)及完整性差異,探討精子mtDNA拷貝數(shù)和完整性與精子質量的關系,以及精子mtDNA對男性生育能力的影響。
　　【方法】

3、實時熒光定量PCR(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction, Real-time PCR)技術是一項已經(jīng)發(fā)展成熟的研究手段,廣泛應用于分子生物學和細胞生物學研究領域,具有快速、靈敏、準確的特點,能定量檢測目的基因拷貝數(shù)及表達量的變化。本實驗采用Percoll非連續(xù)密度梯度離心法將精液樣本分為30%層精子和80%層精子,應用Real-time PCR技術定量分析不同質量精子各層mt

4、DNA拷貝數(shù)。同時應用長鏈PCR技術測定不同質量精子80%層mtDNA完整性。
　　【結果】52例精液樣本中,正常組30%層精子mtDNA拷貝數(shù)(4.85±3.00)與其80%層精子(0.80±0.45)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);弱精子癥組30%層精子mtDNA拷貝數(shù)(1.92±1.29)與其80%層精子(0.70±0.52)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);少精子癥組30%層精子mtDNA拷貝數(shù)(13.33±

5、9.96)與其80%層精子(1.52±0.68)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);少弱精子癥組30%層精子 mtDNA拷貝數(shù)(5.34±4.62)與其80%層精子(1.93±0.65)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在80%層精子中,少精子癥組(1.52±0.68)與少弱精子癥組(1.93±0.65)mtDNA拷貝數(shù)與正常組(0.80±0.45)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);少弱精子癥組(9.33±2.71)mt

6、DNA完整性與正常組(27.01±17.36)、弱精子癥組(32.36±21.75)及少精子癥組(17.63±7.64)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。在30%層精子中,少精子癥組(13.33±9.96)和弱精子癥組(1.92±1.29) mtDNA拷貝數(shù)與正常組(4.85±3.00)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。比較80%層精子各參數(shù)相關性, mtDNA拷貝數(shù)與 mtDNA完整性呈負相關(r=-0.6261,P<0.