外周血線粒體DNA拷貝數(shù)與急性冠脈綜合征患病風險的相關性研究.pdf

1、研究背景：
　　如今，急性冠脈綜合征（Acute coronary syndrome, ACS）屬于在缺血性心臟?。↖schemia Heart Disease，IHD）類疾病中致死致殘的主要原因。因此，ACS患者的早期診治與其預后水平息息相關。
　　線粒體作為細胞中的能量制造結構，能夠對細胞內(nèi)能量的產(chǎn)生，以及細胞內(nèi)氧化與還原狀態(tài)進行調(diào)節(jié)，同時與活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的生成也具有一定

2、的關系。但由于缺乏具有保護作用的組蛋白，線粒體 DNA（Mitochondrial DNA，mtDNA）對自身損傷的修復能力極其有限。在受到氧化應激反應后其損傷的發(fā)生率要明顯高于核基因組DNA。近期，研究證據(jù)發(fā)現(xiàn)血管組織中mtDNA損傷與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關。然而，ACS的發(fā)病風險與外周血白細胞mtDNA拷貝數(shù)的關系卻鮮見報道，這種現(xiàn)象是否具有普遍意義仍不清楚。本課題針對400名前往我科就診的ACS疑似癥狀的人群進行研究，以探

3、索外周血mtDNA拷貝數(shù)與ACS發(fā)病風險的關系，并通過Gensini評分對冠狀動脈粥樣硬化病變的嚴重程度進行評估，了解外周血mtDNA拷貝數(shù)與急性冠脈綜合征嚴重程度是否存在相關性。從而驗證mtDNA拷貝數(shù)是否能為ACS的發(fā)病風險以及嚴重程度的預測提供證據(jù)支持，顯著提高ACS患者的預后水平。
　　方法：
　　1.本課題采用橫斷面研究實驗設計的方法，納入年齡為31-87歲的400例前往第四軍醫(yī)大學附屬西京醫(yī)院心血管內(nèi)科就診的疑似

4、ACS患者。所有入組的研究對象均為漢族。
　　2.采集400例入組人群的外周血細胞，利用 Qiagen試劑盒提取外周血細胞的DNA，放-80℃冰箱冷凍保存。
　　3.采用實時相對定量聚合酶鏈反應（quantitative polymerase chain reaction， qPCR）來測定納入的急性冠脈綜合征組及不滿足診斷的對照組中所有研究對象的外周血細胞中mtDNA的相對拷貝數(shù)。
　　4.在第四軍醫(yī)大學附屬西京醫(yī)院

5、倫理委員會和納入研究人群的知情同意下，收集所有研究對象的年齡、性別、體質指數(shù)、體重、吸煙史、高血壓史、糖尿病史以及血液檢查中的白細胞計數(shù)、高密度脂蛋白，低密度脂蛋白、甘油三酯、總膽固醇、空腹血糖、肌酐和尿酸等結果。與此同時，所有入組人群均進行冠狀動脈造影，記錄結果后通過Gensini評分對冠狀動脈血管病變的嚴重程度進行評估，而后根據(jù)400名入組人群Gensini評分的四分位數(shù)間距從輕到重分為4組。
　　5.通過SPSS22.0軟件

6、對研究結果進行分析，包括ACS患者組與對照組間，及四個 Gensini評分組間的外周血 mtDNA拷貝數(shù)是否存在差異；mtDNA拷貝數(shù)與Gensini評分間是否存在相關性；以優(yōu)勢比（Odds Radio，OR）以及優(yōu)勢比的95％可信區(qū)間（Confidence Interval，CI）來估計mtDNA拷貝數(shù)與ACS發(fā)病風險的關系。研究中所有P的取值均為雙尾，P<0.05或95%CI不包含1.0被認為具有顯著統(tǒng)計學意義。
　　6.本研

7、究已經(jīng)于Clinicaltrial.gov網(wǎng)站上進行注冊，注冊號為NCT02500823。
　　結果：
　　1.研究對象基線資料分布特征。不同 Gensini評分組在基線資料如：性別（P=0.163），年齡（P=0.812），體質指數(shù)（P=0.623）以及糖尿?。≒=0.110），高血壓（P=0.072）和吸煙史（P=0.363）中均具有良好的匹配性，未出現(xiàn)統(tǒng)計學差異。
　　2. mtDNA拷貝數(shù)的分布特征。急性冠脈綜

8、合征患者外周血中mtDNA拷貝數(shù)為0.78（range：0.61-1.02）低于對照組外周血mtDNA拷貝數(shù)0.83（range：0.70-1.15），二者存在顯著統(tǒng)計學差異（ P<0.001）。根據(jù)研究對象的冠狀動脈狹窄程度評分（Gensini評分）的四分位數(shù)間距進行分組，其線粒體DNA拷貝數(shù)分別為0-22分組是0.84(0.70-1.15)，22-55分組為0.81(0.70-1.01)，55-96分組是0.79(0.70-0.98

9、)和大于96分為0.77(0.61-0.94)，該四組間的mtDNA拷貝數(shù)具有顯著的統(tǒng)計學差異（P<0.001）。
　　3. mtDNA拷貝數(shù)與Gensini評分相關性。以mtDNA的拷貝數(shù)水平為應變量， Gensini評分作為自變量，利用Spearman相關性檢驗來對mtDNA拷貝數(shù)與冠狀動脈血管的狹窄程度（Gensini評分）是否具有相關性進行分析。分析發(fā)現(xiàn) mtDNA拷貝數(shù)與Gensini評分具有顯著的負相關性，相關系數(shù)r=

10、-0.387，P<0.001。mtDNA拷貝數(shù)隨著Gensini評分的升高而逐漸降低。
　　4.通過非條件logistic回歸來分析mtDNA拷貝數(shù)與ACS發(fā)病風險的關聯(lián)，在同樣經(jīng)過低密度脂蛋白（LDL-C），高密度脂蛋白（HDL-C），總甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）等血脂指標，肌酐（Creatinine），尿酸（Uric acid）等腎功能指標，高血壓史、糖尿病史、吸煙史、性別、年齡等混雜因素的校正后，mtDNA拷貝數(shù)小于

11、0.83的研究人群與mtDNA拷貝數(shù)大于等于0.83的人群相比較，其ACS患病風險出現(xiàn)了顯著的增高（adjusted OR=2.34,95%CI,1.43-3.83，P<0.001）。進一步將對照組mtDNA拷貝數(shù)以四分位數(shù)法取得截斷值，可發(fā)現(xiàn)外周血白細胞的mtDNA拷貝數(shù)與ACS發(fā)病風險呈劑量依賴關系（P<0.001），以第一個四分位點（第25個百分點值）即mtDNA拷貝數(shù)大于0.88為參考值，mtDNA拷貝數(shù)分別為第50個百分點值和

12、第75個百分點值作為截斷值的研究人群罹患ACS的風險逐漸增加[adjusted OR分別為1.78(95%CI,1.15-3.51)，2.21(95%CI,1.65-3.74)和4.83(95%CI,2.67-8.64)]。
　　結論：
　　ACS患者與對照組的外周血mtDNA拷貝數(shù)具有顯著差異，不同Gensini評分組間mtDNA水平也具有顯著差異，并且mtDNA拷貝數(shù)與Gensini評分呈顯著負相關。急性冠脈綜合癥患者外