帶芒草屬低分子量谷蛋白基因的克隆及序列分析.pdf

1、低分子量谷蛋白亞基(Low-molecular-weightgluteninsubunit，LMW-GS)約占小麥谷蛋白總量的60％以上，是小麥種子胚乳中的重要貯藏蛋白，可直接影響小麥面粉的加工品質(zhì)。目前，在普通小麥中已經(jīng)獲得了大量的低分子量谷蛋白基因序列，而在小麥近緣屬物種中獲得的同源基因則比較少，導(dǎo)致對麥類低分子量谷蛋白基因家族成員間的關(guān)系還不清楚。因此，進(jìn)行近緣屬物種低分子量谷蛋白基因的研究是非常必要的。 帶芒草屬(Tae

2、niatherumNevski.，2n=2x=14，TaTa)是與小麥及其它近緣屬親緣關(guān)系都比較遠(yuǎn)的一個(gè)一年生屬，生長的干旱嚴(yán)酷生態(tài)環(huán)境和嚴(yán)格的自花授粉等條件使其形成相對獨(dú)立的基因庫，導(dǎo)致了它與小麥和其它小麥近緣屬物種在天然的非人為干預(yù)狀態(tài)下進(jìn)行低分子量谷蛋白基因交流的可能性非常小，使帶芒草成為一種研究低分子量谷蛋白基因在小麥族物種間對比研究與認(rèn)識的好材料。為了認(rèn)識和利用其中的低分子量谷蛋白基因，本研究對其進(jìn)行了克隆和測序，主要結(jié)果如下

3、： 1.帶芒草低分子量谷蛋白基因的PCR分離與鑒定通過特殊設(shè)計(jì)的1對引物，利用PCR法從長發(fā)帶芒草(Ta.crinitum)居群PI220590基因組總DNA中擴(kuò)增獲得一條約1000bp的片斷，此片段與麥類低分子量谷蛋白基因大小相當(dāng)，回收純化后克隆到載體pMD18-T載體中，經(jīng)過克隆進(jìn)行測序，得到1個(gè)完整的基因序列，其GenBank登錄號為EU350087。經(jīng)序列比對和分析發(fā)現(xiàn)，該序列具有單一完整的開放閱讀框(ORF)，與麥類已

4、知低分子量谷蛋白亞基基因具有完全一致的典型結(jié)構(gòu)區(qū)域，是1個(gè)小麥低分子量谷蛋白基因的同源序列。表明在帶芒草中克隆到低分子量谷蛋白基因。 2.帶芒草低分子量谷蛋白基因的序列特征及與麥類同源基因的關(guān)系分離到的帶芒草居群PI220590的低分子量谷蛋白基因的全長為1035bp，可編碼345個(gè)氨基酸殘基。根據(jù)推導(dǎo)的氨基酸N-末端序列，該基因?yàn)長MW-m型。分別以其信號肽、N端和C端的核苷酸和氨基酸在NCBI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，發(fā)現(xiàn)該基因類型在