蜻蜓鳳梨和鐵蘭植株再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、觀賞鳳梨品種繁多，不少種類具有較高的觀賞價值，是一類非常惹人喜愛的新穎花卉，有很好的發(fā)展前景。但目前國內(nèi)外觀賞鳳梨的轉(zhuǎn)基因育種仍處于起步階段，轉(zhuǎn)基因方面的研究仍為空白。因此，有必要盡快建立起觀賞鳳梨的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系。 本研究以蜻蜓鳳梨和鐵蘭兩種觀賞鳳梨為材料，系統(tǒng)的研究了其植株再生和農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化體系。研究結(jié)果如下： (1)利用不同種類不同濃度激素配比的培養(yǎng)基，對鐵蘭無菌苗短縮莖進行愈傷組織誘導試驗，獲得較為適宜

2、愈傷組織誘導的培養(yǎng)基為：MS+2，4-D2.0mg/L+IBA0.2mg/L+6-BA2.0mg/L，誘導率達75％，經(jīng)組織學觀察表明為胚性愈傷組織，且胚性愈傷組織質(zhì)量較好。將胚性愈傷組織接種于MS+NAA0.2mg/L+ABA0.2mg/L的培養(yǎng)基上，分化率高達81.5％。生根培養(yǎng)基以MS+IBA1.25mg/L+LAA0.8mg/L為好，生根率高達92.7％。 (2)建立了以蜻蜓鳳梨無菌苗葉片為外植體直接誘導產(chǎn)生不定芽獲得完

3、整植株的再生體系。最適培養(yǎng)基為MS+6-BA5.0mg/L+NAA2.0mg/L，葉片基部的葉段分化率高達83.3％；生根培養(yǎng)基以MS+NAA0.5mg/L為好，生根率達100％，且根較粗壯。 (3)篩選出鐵蘭胚性愈傷組織和蜻蜓鳳梨無菌苗葉片的Km基礎(chǔ)抗性濃度分別為90mg/L和600mg/L。 (4)鐵蘭胚性愈傷組織預(yù)培養(yǎng)10d后進行轉(zhuǎn)化，在OD600≈0.6農(nóng)桿菌菌液中侵染30min，共培養(yǎng)2d，GUS瞬時表達最佳，