啤酒酵母多糖的純化工藝及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、多糖具有多種生理活性，如抗腫瘤，抗感染，增強(qiáng)機(jī)體免疫活性等而為人們關(guān)注。 本論文通過脫蛋白、脫脂、離子交換柱層析和凝膠柱層析對(duì)酵母多糖粗品進(jìn)行純化處理，并通過化學(xué)分析和儀器分析方法檢測多糖的結(jié)構(gòu)，獲取酵母多糖的結(jié)構(gòu)信息。其主要研究內(nèi)容如下： ①酵母多糖的脫蛋白方法的研究：采用Sevag法、Sevag法與酶法結(jié)合的方法，比較分析得出最佳脫除酵母多糖蛋白質(zhì)的試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明：Sevag法后多糖損失較嚴(yán)重，且脫蛋白效果不如酶

2、法結(jié)合Sevag法。酶法結(jié)合Sevag法的最佳工藝條件為：水解溫度60℃，pH7.0，加樣量3:1，通過該方法脫蛋白后樣品多糖含量為72.12％，蛋白質(zhì)濃度為6.86mg/mL。 ②酵母多糖的脫脂方法的研究：以提取物中的酵母多糖含量為測定指標(biāo)，考察溶劑石油醚與乙醚、回流時(shí)間及料液比三個(gè)因素對(duì)脂肪脫除的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)乙醚：石油醚比例為1:3、提取溫度為50℃、提取時(shí)間為5h效果最佳。經(jīng)脫脂處理后，多糖含量可達(dá)74.06％。

3、 ③酵母多糖的柱層析：采用DEAE-52離子交換層析和Sephadex G200凝膠柱層析對(duì)脫蛋白和脂肪后的酵母多糖進(jìn)行進(jìn)一步分離純化研究。經(jīng)離子交換層析和凝膠層析分離純化后，得到多糖精制品YPS-I。 ④YPS I分子量的測定：采用GPC/RI/MALLS聯(lián)機(jī)對(duì)YPS I分子量進(jìn)行測定，YPS I為相對(duì)均一多糖，分子量分布相對(duì)集中，重均分子量MW為2.083×105。 ⑤YPS I結(jié)構(gòu)的分析研究：通過摸索單糖衍生

4、條件和酵母多糖水解試驗(yàn)，得出最適衍生條件：溫度80℃、時(shí)間20min、衍生劑加入量170μL；酵母多糖的最佳水解條件為：三氟乙酸濃度3.0mol/L、水解時(shí)間2h。HPLC檢測YPS I單糖組成，確定其由葡萄糖聚合而成。 對(duì)YPS I用IR檢測，圖譜顯示樣品具有多糖的特征吸收峰，YPS I為含β-糖苷鍵的六元葡萄吡喃糖。 通過對(duì)YPS I高碘酸氧化和Smith降解，得出YPS I為以1→3鍵型為主鏈，并含有部分1→6鍵型