小鼠胰腺癌演進中髓系來源抑制細胞的動態(tài)變化及體外誘導腫瘤相關巨噬細胞分化的研究.pdf

1、背景與目的：
　　胰腺癌免疫治療為近年來研究熱點，進行體內免疫治療研究最重要一步為建立免疫健全小鼠的胰腺癌動物模型，從而更好的模擬人胰腺癌的腫瘤微環(huán)境。髓系來源抑制細胞(myeloid derived suppressor cells，MDSC)與腫瘤相關巨噬細胞（tumor associated macrophages，TAM）為重要的兩群腫瘤免疫調節(jié)細胞，可抑制多種免疫效應細胞的功能，與腫瘤的發(fā)生、進展密切相關。本研究嘗試利用

2、小鼠胰腺癌細胞系Panc02細胞建立小鼠胰腺癌皮下移植瘤模型，并進一步觀察荷瘤鼠胰腺癌在發(fā)生發(fā)展過程中MDSC的動態(tài)變化。同時嘗試利用Panc02培養(yǎng)上清液體外誘導小鼠單核巨噬細胞系RAW264.7向TAM分化。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)Panc02細胞，將處于對數生長期的1×106個/100μl腫瘤細胞接種于C57BL/6J小鼠左前腋窩皮下，觀察腫瘤生長變化情況，擇時取材切片做H&E染色。根據瘤體大小，將腫瘤定義為Tx期（

3、可疑瘤體形成）、T1期（0＜瘤體體積≦500mm3）、T2期（500mm3＜瘤體體積≦1750mm3）、T3期（1750mm3＜瘤體體積≦4000mm3）、T4期（4000mm3＜瘤體體積）。分別取荷瘤鼠與正常鼠外周血、脾臟行流式染色。然后分析外周血和脾臟中CD11b+Gr-1+MDSC及其亞群（CD11b+Ly6C+MDSC、CD11b+Ly6G+MDSC）動態(tài)變化。用小鼠胰腺癌Panc02細胞系的培養(yǎng)上清刺激單核巨噬細胞系RAW26

4、4.7，誘導72小時后收集細胞，流式細胞儀上機檢測RAW264.7向TAM分化情況。
　　結果：
　　小鼠平均成瘤時間約為12天，成瘤率100％，接種后3-4周進入快速生長期。腫瘤質地較硬，晚期表面可有破潰出血。皮下瘤組織病理切片H&E染色后可見組織細胞排列混亂、極性消失，細胞核分裂相多見、異型性明顯，并可見不典型腺腔結構及播散分布的癌巢，符合惡性導管上皮樣癌表現(xiàn)。正常對照小鼠外周血CD11b+Gr-1+細胞群為7.3％，T

5、x、 T1、T2、T3、T4外周血CD11b+Gr-1+細胞群分別為3.7％、4.9％、11.6％、16.7％、25％;正常對照小鼠外周血中CD11b+Ly6C+、CD11b+Ly6G+細胞群分別為6.2％和4.8％，Tx、T1、T2、T3、T4外周血中CD11b+Ly6C+細胞群分別為4.9％、12.6％、8.5％、18％、24.7％，CD11b+Ly6G+細胞群分別為3.8％、9.5％、6.6％、19.9％、24.9％。正常對照小鼠

6、脾標本中CD11b+Gr-1+細胞群為3.4％，CD11b+Ly6C+、CD11b+Ly6G+細胞群分別為3.9％和3.6％; T4荷瘤小鼠脾標本中CD11b+Gr-1+細胞群為20.4％，CD11b+Ly6C+、CD11b+Ly6G+細胞群分別為15.5％和13.9％。腫瘤上清液刺激RAW264.7后M1型（F4/80+CD16/32+）及M2型(F4/80+CD206+)TAM較對照組均明顯升高(44.2％vs28.5％，18.5％