牛體外受精技術體系的優(yōu)化研究.pdf

1、自1982年第一頭牛體外受精后代出生以來，雖然國內外學者對牛的體外受精(in vitro fertilization，IVF)技術進行了不斷的完善，但是目前對于一些因素對IVF效率的影響還存爭議。因此，有必要對牛的IVF體系進行優(yōu)化研究。這不僅有助于進一步明確這些因素對IVF的影響，而且對于提高IVF胚胎生產效率及加速IVF技術在生產上的推廣應用都有重要的意義。本研究在目前國內外體外受精研究的基礎上，對牛卵母細胞體外成熟(in vitr

2、o maturation，IVM)、IVF及早期胚胎的體外培養(yǎng)(in vitro culture，IVC)作了進一步的優(yōu)化研究，并重點研究了葡萄糖對牛IVF及早期胚胎體外培養(yǎng)的影響。旨在建立一套經過優(yōu)化的牛IVF技術體系。 1.在卵母細胞體外培養(yǎng)中，比較了不同蛋白質添加物(胎牛血清，fetal.bovine serum，F(xiàn)BS；新生牛血清，newborn calf serum，NCS；牛血清白蛋白，bovine serum al

3、bumin，BSA)以及表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)對卵母細胞IVM的影響。結果表明，與BSA相比，血清可以顯著促進卵母細胞的成熟，而FBS對成熟效果要好于NCS。EGF添加量在20ng/mL時即明顯促進卵母細胞的成熟率，隨著其濃度的增加，卵母細胞成熟率并未相應增加。 2.在精子獲能和受精中，不同公牛個體對體外受精卵裂率、8-細胞胚胎發(fā)育率及囊胚率均有明顯影響，就體外受精卵裂率來講，2號

4、牛(62.3％)和3號牛(67.4％)顯著高于5號牛(35.8％，P<0.01)。精子獲能液中肝素的添加劑量對體外受精的影響僅表現(xiàn)在卵裂率的差異，50 ng/mL組的卵裂率(71.3％)顯著高于10 ng/mL組(62.1％，P<0.05)。就卵裂率及囊胚率來講，獲能液和受精液中的葡萄糖添加與否對IVF無明顯影響。 3.受精卵體外培養(yǎng)時，無論在開始進行胚胎培養(yǎng)時就加入葡萄糖，還是先在不含葡萄糖的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48 h后添加葡萄糖，

5、5.6 mmol/L組的囊胚發(fā)育率均明顯低于其他各組。這表明，在體外高濃度的葡萄糖會抑制牛IVF胚胎的體外發(fā)育。在培養(yǎng)開始時即加入3.0 mmol/L葡萄糖時，其8-細胞胚胎發(fā)育率低于不添加葡萄糖組(50.9％vs 60.6％，P<0.05)；而在培養(yǎng)48 h后加入3.0 mmol/L葡萄糖時，其8-細胞胚胎與不添加葡萄糖組無明顯差異(59.8％，59.3％，P>0.05)，這提示葡萄糖對胚胎發(fā)育的影響與其添加時期有關。在以FBS為蛋白