牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)、體外受精及受精卵體外培養(yǎng)研究.pdf

1、本文主要對牛卵巢卵母細(xì)胞體外成熟、體外受精以及受精卵的不同體外發(fā)育條件進(jìn)行研究，以探明胚胎體外生產(chǎn)部分環(huán)節(jié)的影響因素。 分別采用抽吸法、割破法采集卵巢表面卵母細(xì)胞，檢驗(yàn)不同采集方法對卵巢卵母細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的影響。試驗(yàn)表明：抽吸法的回收率(86.19％)高于割破法(78.46％)，但二者無顯著差異。割破法獲得的A級卵母細(xì)胞數(shù)極顯著高于抽吸法(p<0.01)，抽吸法獲得的C級卵母細(xì)胞顯著高于割破法(p<0.05)。 根據(jù)有無

2、黃體將采集到的卵巢分為兩種，各取20枚進(jìn)行試驗(yàn)，觀察有無黃體對卵母細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量以及體外培養(yǎng)成熟率的影響。結(jié)果表明：有黃體的卵巢和無黃體的卵巢平均卵泡數(shù)分別為11個(gè)和20個(gè)，差異極顯著(p<0.01)。在相同培養(yǎng)條件下，無黃體卵巢卵母細(xì)胞的成熟率為84.33％，顯著高于有黃體卵巢卵母細(xì)胞的成熟率74.32％(p<0.05)，兩種卵巢收集到的可用卵母細(xì)胞比率(A、B級卵母細(xì)胞占總數(shù)的百分比)差異不顯著。 以TCM-199為基礎(chǔ)培養(yǎng)

3、液，分別添加10％NCS(對照組)，10％NCS+10％BFF(第1組)，10％NCS+20％BFF(第2組)，10％NCS+30％BFF(第3組)，10％NCS+40％BFF(第4組)，10％BFF(第5組)，20％BFF(第6組)，30％BFF(第7組)，觀察自制NCS和BFF對卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)影響。結(jié)果表明：第2組卵母細(xì)胞的成熟率為84.93％，與對照組(65.08％)相比，差異極顯著(p<0.01)。當(dāng)與NCS一起添加，卵泡

4、液添加劑量超過20％時(shí)，其成熟率與卵泡液添加劑量成負(fù)相關(guān)。單獨(dú)添加卵泡液，劑量超過20％時(shí)，成熟率也呈下降趨勢。 采用割破法采集卵巢表面2-6mm卵泡卵母細(xì)胞和用切割法采取卵巢深層卵母細(xì)胞進(jìn)行IVM、IVC比較，兩者的成熟率分別為58.20％和55.84％，差異不顯著。位于卵巢表面卵泡的卵母細(xì)胞體外受精后的卵裂率為 54.76％，高于卵巢深層卵母細(xì)胞的卵裂率(48.53％)，但二者差異不顯著。 將體外受精卵與輸卵管上皮細(xì)

5、胞、卵丘細(xì)胞共同培養(yǎng)，并將其分成第1組(IVM、IVC時(shí)添加輸卵管上皮細(xì)胞和卵丘細(xì)胞)；第2組(IVM時(shí)添加卵丘細(xì)胞、IVC時(shí)添加輸卵管上皮細(xì)胞)；第3組(IVM、IVC時(shí)添加輸卵管上皮細(xì)胞)； 第4組(IVM、IVC時(shí)添加卵丘細(xì)胞)；對照組不添加細(xì)胞。結(jié)果表明：第2組的成熟率、卵裂率和囊胚發(fā)育率分別為85.90％、65.38％、42.31％，極顯著高于(p<0.01)對照組(52.38％、34.92％、19.05％)，且其成熟

6、率也顯著高于第3組(p<0.05)，第2組的卵裂率和囊胚發(fā)育率與第4組差異顯著(p<0.05)。對照組的卵裂率和囊胚發(fā)育率明顯低于第3組(p<0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明，在牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)、體外受精及受精卵體外培養(yǎng)研究中，割破法可以得到更多的可用卵母細(xì)胞；無黃體的卵巢卵母細(xì)胞體外成熟效果優(yōu)于有黃體的卵巢卵母細(xì)胞；卵巢深層的卵母細(xì)胞體外成熟率和受精后卵裂率與卵巢表面卵泡卵母細(xì)胞無明顯差異；成熟培養(yǎng)液中添加10％NCS+20％BFF能顯