牛成纖維細(xì)胞系的建立、體外受精及核移植的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)是在新建胚胎實(shí)驗(yàn)室建立牛成纖維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)體系和核移植技術(shù)體系，完善和熟化體外受精技術(shù)體系。并為優(yōu)秀公牛遺傳資源的保存，試管牛和廉價(jià)胚胎生產(chǎn)以及轉(zhuǎn)基因牛的研究打下基礎(chǔ)。研究結(jié)果表明： 1.采用組織塊貼壁法建立了優(yōu)秀奶牛種公牛耳組織成纖維細(xì)胞系。細(xì)胞凍存代數(shù)在3-4代，凍存密度達(dá)到1×106個(gè)/ml以上：復(fù)蘇后細(xì)胞存活率不存在差異，均保持在90％以上；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈“S”型；細(xì)胞系微生物檢測(cè)結(jié)果均為陰性，未受到細(xì)菌

2、和支原體污染。 2.完善與熟化了牛體外受精技術(shù)體系。采集卵母細(xì)胞547枚，進(jìn)行受精胚胎和孤雌胚胎的發(fā)育及發(fā)育速度的比較。體外受精卵的卵裂率(69.8％)、8細(xì)胞率(47.3％)和囊胚率(26.1％)低于對(duì)照組孤雌胚胎的卵裂率(73.0％)、8細(xì)胞率(49.2％)和囊胚率(32.6％)。二者的胚胎發(fā)育都在第6d開(kāi)始有囊胚出現(xiàn)，集中在第6d、7d和8d。而且實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體中的卵丘細(xì)胞能將體外受精胚胎囊胚發(fā)育率由10.

3、2％提高到27.5％，在培養(yǎng)液中添加Vero細(xì)胞，能將體外受精胚胎囊胚發(fā)育率由12.4％提高到27.5％，卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體中的卵丘細(xì)胞及以Vero細(xì)胞作為飼養(yǎng)層細(xì)胞能明顯提高體外受精胚胎囊胚發(fā)育率。 3.建立了牛體細(xì)胞核移植技術(shù)體系。牛體細(xì)胞核移植的卵裂率(72.4％)、8細(xì)胞率(38.8％)和囊胚發(fā)育率(11.2％)低于對(duì)照組卵母細(xì)胞孤雌激活的卵裂率(78.8％)、8細(xì)胞率(55.3％)囊胚發(fā)育率(34.9％)。兩組的卵裂