2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、山西醫(yī)科大學碩士學位論文RNA干擾對HepG2細胞AFP基因表達的影響姓名:張國英申請學位級別:碩士專業(yè):病理學指導教師:梁建芳20050606山西醫(yī)科大學碩士學位論文RNA干擾對HepG2$BflAFP基因表達的影響摘要目的:研究RNA干擾(RNAi)技術對HepG2細胞AFP基因表達的影響,以及抑制AFP表達后對HepG2細胞增殖及凋亡作用的影響。方法:第一部分RNA干擾(RNAinterferenceRNAi)抑制HepG2細胞A

2、FP基因表達方法的建立。l_目標基因序列的選擇及質粒載體構建,經(jīng)B1ast軟件查對及序列同源性分析,選擇兩條目標基因序列——AFPl與AFP2,構建質粒載體pGenesi卜卜AFPl(含綠色熒光蛋白編碼序列)及pGenesi卜2一AFP2。2用陽離子脂質體META/質粒載體pGenesil一1AFPI不同劑量及濃度配比轉染HepG2細胞,熒光顯微鏡觀察轉染效率,并檢測細胞培養(yǎng)上清液AFP的量的變化,篩選出最佳陽離子脂質體META/質粒載

3、體pGenesil一卜AFPl配比。第二部分RNA干擾技術對HepG2細胞AFP基因表達的影響。1轉染試劑METAFECTENE/質粒載體混合液配制及轉染細胞。2采用微粒子化學發(fā)光免疫分析法檢測轉染后24,48,72小時培養(yǎng)上清液中AFP的含量。3采用間接免疫細胞化學技術觀察處理組和對照組細胞內AFP基因表達情況,了解在細胞水平pGenesi卜AFPsiRNA對AFP表達的抑制作用。第三部分siRNA抑制AFP表達對HepG2細胞增殖及

4、凋亡的影響。分別應用MTT比色法,DNAFragmentation及檢測細胞內cAMP水平來觀察。結果:1篩選出最佳的陽離子脂質體META/質粒載體pGenesil一1一AFPl轉染復合物的配比為8ul:2511g。2轉染pGenesi卜卜siAFPl與pGenesil—2一siAFP2的實驗組與對照組比較,AFP含量下降明顯(PO01):pGenesil一卜siAFPl實驗組與pGenesi卜2一siAFP2實驗組比較,AFP含量在各

5、時段均顯著下降。3pGenesi卜卜siAFPl的實驗組干擾后DNAFragmentation觀察無細胞凋亡,但是MTT比色法發(fā)現(xiàn)siRNA—AFPl的實驗組對細胞增殖有明顯的抑制作用,對細胞增殖抑制率最高達5135%。。而且實驗組細胞內的camp濃度(1564umol/h)明顯低于各對照組細胞內的cAMP濃度(PO01)。結論:RNA干擾技術能有效地抑制HepG2細胞AFP基因表達,這種方法不僅對體外研究AFP基因功能有一定意義,而且

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