小干擾RNA對(duì)LNCaP細(xì)胞CXCR4基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究小干擾RNA(siRNA)對(duì)前列腺癌(Prostatecancer，Pca)細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞中CXC趨化因子受體4(CXCR4)mRNA表達(dá)的影響。 方法：選擇人CXCR4基因的一個(gè)靶點(diǎn)，體外合成siRNA的DNA模板，經(jīng)退火后插入到質(zhì)粒Psilencer2.1-U6neo載體的多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建siRNA表達(dá)載體。重組表達(dá)質(zhì)粒在脂質(zhì)體Lipofectamine2000介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染人前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞，用RT

2、-PCR方法檢測(cè)重組體對(duì)CXCR4mRNA表達(dá)水平的影響。實(shí)驗(yàn)設(shè)立空白對(duì)照組、陰性對(duì)照Psilencer-C轉(zhuǎn)染組、和目的組Psilencer-siCXCR4轉(zhuǎn)染組。 結(jié)果：經(jīng)酶切、測(cè)序證明重組質(zhì)粒Psilence-siCXCR4構(gòu)建成功；該重組體轉(zhuǎn)染LNCaP48小時(shí)后，RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示CXCR4/β-actin條帶光密度比值分別為：空白對(duì)照組為0.61±0.03；陰性對(duì)照組為0.59±0.04；目的組為0.15±0.

3、01?？瞻讓?duì)照組與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.01)，目的組分別與空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；其抑制率為(75.00±3.16)％，表明LNCaP細(xì)胞中CXCR4mRNA表達(dá)受到明顯抑制。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的RNA干擾序列、構(gòu)建的RNA干擾重組體有效地抑制了前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞中CXCR4mRNA的表達(dá)，與我們的預(yù)期結(jié)果一致。我們結(jié)果與許多國(guó)內(nèi)外的研究結(jié)果相符。說(shuō)明RNA