波形蛋白RNA干擾對人肝癌細胞系HepG2影響的研究.pdf

1、內(nèi)蒙古醫(yī)學院碩士學位論文波形蛋白RNA干擾對人肝癌細胞系HepG2影響的研究姓名：呼格吉樂申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：王文禮20100501oE f f e c t so f 刪R N A i n t e r f e r e n c eo n t h ea c t i v i t yo fH e p G 2 c e l l sA b s t r a c tO b j e c t i v e E u k a r y o f i

2、 ce x p r e s s i o nv e c t o ro fR N A i n t e r f e r e n c es p e e i f c f o rV I Mt h a tw a ss t a b l e t r a n s f e e t i o n t oi n h i b i t t h ee x p r e s s i o no f V I M i nH e p G 2 c e l l w a s c o n

3、s t r u c t e d v i a t h et e c h -n i c l u eo fR N A i n t e r f e r e n c e ．I ti s c r i t i c a lt oi d e n t i f yt h ea c t i v i t yo f c e l lp w 磁e m f i o n ，a p o p t o s i s ，i n v a s i o na n d m e t a s

4、t a s i so fh u m a n h e p a t o m ac e l l sH e p G 2 t h a ti n h i b i t i o no fV I Me x p r e s s i o n ，t or e s e a r c ht h er o l e t h a tV I Mp l a yi nt h ep r o c e s so fc e l l p m H f e m t i o n ，a p o

5、p t o s i s ，i n v a s i o na n dm e t a s t a s i so f h e p a t o c a r e i n o m a a n d p r o v i d e v a l u a b l et h e o r e t i c a lb a s i s f o r t h eo c c u r r e n c ea n d d e —v e l o p m e n ta n d d i

6、a g n o s i s o fh e p a t o m a ．M e t h o d 1 ．F o u re u k a r y o t i c e x p r e s s i o nv e c t o r so fR N A i n t e r f e r e n c es p e c i f i c f o rV I M W a s c o n s t r u c t e d ，w h o s en a I l l e 8a

7、r ep c D N A T M 6 ．2 一G W ／E m G F P —V I M —S R 9 0 —1 —3 ，p c D N A T a 6 ．2 一G W ／E m G F P —V I M —S R 9 0 —2 —1 ，p e D N A T M6 ．2 一G W ／E m G F P —V I M —S R 9 0 —3 - 2 ，p c D N A r M 6 ．2 一G W ／E m G F P —V I M —

8、S B 9 0 - 4 —1 ．C o n s t r u c t i o no fs i R N A ss e q u e n c ei s a s 8 8 1 1 1 e 8 sg e n e l i b r a r ys e q u e n c eb ye l e c t r o p h o r e s i sa n ds e q u e n c i n g ．2 ．H e p a t o m aH e p G 2 c e l l

9、 l i n ew a st r a n s f e c t e dw i t hf o u r v e c t o r sa b o v e v i ao l i -g o f e c t a m i n e ．S t a b l et r a n s f e c f i o nH e p G 2 c e l ll i n e sw e r eo b t a i n e d b YB l a s t i c i d i ns e l

10、e c t i o n ．3 ．I no r d e rt o c h o o s et h eb e s to n e ，m R N A c o n t e n t s o fV I M W a sc o n t r a s t e db yR T —P C R ．4 ．T h ea u x o d r o m ea n dc h a n g e s o fa c t i v i t y o fi n v a s i o na n d

11、m e t a s t a s i so fs t a b l e t r a n s f e c f i o n c e l l l i n ew e r ea s s a y e d ．R e s u l t 1 ．e u k a r y o t i ee x p r e s s i o nv e c t o ro fR N A i n t e r f e r e n c es p e c i f i cf o rV I MW a

12、sc o n s t r u c t e d ．C o n s t r u c t i o no fs i R N As e q u e n c e sw a g 嬲s a m ea sg e n eb a n k ss e q u e n c eb yc h a r a c t e r i z a t i o na n dt h e r e a r e n o tm u t a t i o n ，d e l e t i o na n

13、di n s e r t i o n ．2 ．H e p a t o m aH e p G 2c e l ll i n ew a st r a n s f e c t e dw i t l l f o u rv e c t o r sa b o v e 鋤dt h e n e w c e l l l i n e sa r en a m e d 鼬P 刪一一H e p G 2 、P ⅥM 一2 一H e p G 2 、P Ⅷ- 3 一H

14、e p G 2 、p W 一‘一H e p G 2 ．3 ．V I Ms i R N A c a n s i g n i f i c a n t l ys u p p r e s sV I M m R N A e x p r e s s i o n ，a n dq u a n t i t yo fm R N A o fP 刪～一H e p G 2i s t h el e a s t ．4 ．p W ～一H e p G 2 c e l l