三氧化二砷抑制鼻咽癌細胞EB病毒潛伏膜蛋白1及其抗癌效應的研究.pdf

1、1三氧化二砷抑制鼻咽癌細胞三氧化二砷抑制鼻咽癌細胞EBEB病毒潛伏膜蛋白病毒潛伏膜蛋白1及其抗癌效應的研究及其抗癌效應的研究20032003級博士生博士生杜彩文杜彩文導師溫博貴教授溫博貴教授汕頭大學醫(yī)學院病理與病理生理學系病理教研室ARSENICTRIOXIDEDOWNREGULATEEPSTEINBARRVIRUSENCODEDLATENTMEMBRANEPROTEIN1ITSANTICANCERACTIVITYINNASOPHARY

2、NGEALCARCINOMACELLSPH.D.CIDATE:CAIWENDUSUPERVIS:PROF.BOGUIWENPATHOLOGICSECTIONDEPARTMENTOFPATHOLOGYPATHOPHYSIOLOGYOFSHANTOUUNIVERSITYMEDICALCOLLEGE基金資助基金資助李嘉誠汕頭大學研究發(fā)展基金（李嘉誠汕頭大學研究發(fā)展基金（L03002）3摘要研究背景和目的研究背景和目的:鼻咽癌與EB病毒感染關系

3、密切，EB病毒編碼的潛伏膜蛋白(LMP1)在鼻咽癌的形成和發(fā)展起著重要作用：阻斷分化、抑制凋亡、促進轉移。在我們的前期工作中表明傳統(tǒng)中藥三氧化二砷（As2O3）能夠誘導鼻咽癌移植瘤分化與凋亡。但是該藥的作用機制是否涉及抑制LMP1目前仍不清楚，值得我們作進一步的研究。為此本論文分二部分對上述問題進行研究:首先是研究As2O3是否抑制LMP1的表達及其在鼻咽癌細胞凋亡中所起的作用；然后是探討經As2O3處理后殘留細胞潛在轉移能力及與LMP

4、1的關系。旨在為開拓As2O3在鼻咽癌應用提供參考。方法方法：以穩(wěn)定表達LMP1的低分化鼻咽癌細胞株HNE1LMP1與不表達LMP1的親本細胞株HNE1為體外研究對象。第一部分：HNE1LMP1細胞與含有不同濃度的As2O3培養(yǎng)基(0、1、2、3、4、5μmolL)共同培養(yǎng)48小時，采用免疫印跡法及激光共聚焦分析LMP1蛋白表達的變化應用RTPCR方法分析LMP1mRNA的含量。然后，兩株細胞接受不同濃度的砷處理48小時，MTT法檢測其

5、半數抑制濃度，了解其對砷的不同敏感性；選擇2、4μmolLAs2O3為研究點，采用相差倒置顯微鏡、HE染色法及TUNEL法檢測細胞的形態(tài)變化及凋亡情況；采用Southernblotting檢測端粒長度的變化，探討LMP1下調在細胞凋亡中所起的作用。第二部分：收集3μmolL方法處理后仍貼壁的細胞，分析其潛在的轉移能力。首先是通過其克隆形成率了解其潛在增殖能力；然后應用人工基底膜的方法評價兩株殘留細胞的粘附、侵襲、穿透能力的變化；West

6、ernblot、免疫組化和RTPCR法分析MMP9的蛋白水平及mRNA含量變化。結果：結果：第一部分：第一部分：一定劑量下的砷（2μmolL以上）作用48h影響LMP1表達，LMP1受抑制程度與砷的濃度相關，濃度越高，抑制越明顯；LMP1陽性的細胞對砷的反應性較好，As2O3作用下48小時，HNE1LMP1的半數抑制濃度是2.22molL，HNE1細胞的半數抑制濃度是5.09molL，2、4μmolL的凋亡指數分別是23.442.4%和