EB病毒潛伏性膜蛋白-1羧基末端活化區(qū)-3在鼻咽上皮細胞轉(zhuǎn)化中的作用及機制.pdf

1、分類號UDCy9971S6密級編號一中南大學CENTRALSoUTHUNlVERSITY碩士學位論文論文題目：嬰痘壹潛迭性腿蛋自二!逡基塞塑活絲匡二墨在縣咽土座細胞轉(zhuǎn)化蟲笪佳屆丞扭劍學科、專業(yè)：痘堡堂：曼瘟堡生堡堂研究生姓名：韭志住導(dǎo)師姓名及其專業(yè)技術(shù)職稱：塑蟹筮趟中南大學二DO六年五月亟主芏位i金奎生塞摘要2、LMPl△232051轉(zhuǎn)化的鼻咽上皮細胞(NP69)生物學特性分析采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pLNSXLMPlwr與pLNSXLMFI

2、△23”51(以pLNSX空載體為對照)導(dǎo)入PA317包裝細胞，600mg／LG418篩選2周后擴大培養(yǎng)，自細胞培養(yǎng)上清獲得后續(xù)實驗所需的感染性逆病毒RVLNSX、RVLMPlwr和RVLMPl△””甜。然后，用濃縮的病毒分別感染鼻咽上皮細胞NP69，400mg／LG418篩選3周后，匯合克隆培養(yǎng)，獲得NP69pLNSX、NP69LMPlwr和NP69一LMPl△23”513種轉(zhuǎn)化細胞系。分別觀察和檢測這些轉(zhuǎn)化細胞的形態(tài)、生長曲線、平板

3、克隆、軟瓊脂生長能力和抗凋亡能力。結(jié)果顯示：(1)NP69LMPl△232。3”細胞的形態(tài)與NP69LMPlwT細胞的一樣，在培養(yǎng)過程中，逐漸由扁平、鵝卵石樣典型上皮形態(tài)逐漸演變成細胞間接觸減少的長梭狀纖維細胞樣形態(tài)；(2)與NP69LMPlwl。細胞相比，NP69LMPl△232琊1細胞的生長和增殖能力降低，在軟瓊脂實驗中形成的集落較野生型減少(25614VS887，P005)，且集落較小。(3)NP69LMPI△23”51細胞抗凋亡

4、能力明顯低于NP69LMPlwr細胞(NP69LMPl△232。51細胞較NP69一LMPlwT細胞的凋亡率為4534_272VS1413198，PO05)。以上結(jié)果提示CTAR3參與了LMPl促細胞增殖、轉(zhuǎn)化和抑制凋亡等信號過程，是LMPl羧基末端重要的轉(zhuǎn)化效應(yīng)位點之一。3、LMPl△23”卯轉(zhuǎn)化的鼻咽上皮細胞(NP69)蛋白質(zhì)組學研究采用雙向凝膠電泳技術(shù)(2DE)分離NP69pLNSX、NP69LMPlww和NP69LMPl△232

5、琊1三株細胞的總蛋白，建立了重復(fù)性和分辨率均較好的NP69pLNSX、NP69LMPlwr和NP69LMPl△232。3”細胞系的雙向凝膠電泳圖譜，總蛋白質(zhì)點數(shù)分別為1099士38、1088士43和1142t：46，平均匹配率為925％。與NP69一pLNSX細胞相比，右ENP69一LMPlwl細胞中，有27蛋白質(zhì)點表達上調(diào)，24個蛋白質(zhì)點表達下調(diào)；與NP69一LMPlwl細胞相比，NP69LMPl△23“51在細胞中表達上調(diào)的蛋白質(zhì)點

6、26個，下調(diào)的蛋白質(zhì)點33個。應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI。TOFMS)檢測，共鑒定了39個差異表達的蛋白質(zhì)點。在這些蛋白質(zhì)中，NP69LMPlw。與NP69pLNSX細胞之間所鑒定的蛋白有參與代謝相關(guān)的酶類蛋白檸檬酸合酶；參與信號傳導(dǎo)通路的膜聯(lián)蛋白A2以及參與轉(zhuǎn)錄和翻譯的相關(guān)蛋白延長因子1等，更多的是與細胞惡性程度相關(guān)及促細胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的一些結(jié)構(gòu)蛋白，如波形蛋白、核纖層蛋白～fC、細胞角蛋白19等。另外，NP69LM