細(xì)胞因子MIF和HGF抑制鼻咽癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、本研究目的旨在觀察細(xì)胞因子MIF和HGF對鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響作用，并探討這兩種細(xì)胞因子對鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響機(jī)制，進(jìn)一步闡明鼻咽癌發(fā)生和發(fā)展演進(jìn)的機(jī)制。 材料與方法： 收集2000年11月～2005年11月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院確診未治的鼻咽癌病例93例，以脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TIUNEL)對癌組織進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測，免疫組化染色檢測MIF、HGF-α、c-Met、p53、Bcl-2、Bax等凋亡

2、相關(guān)蛋白在癌組織中的表達(dá)。細(xì)胞培養(yǎng)未分化型非角化性癌細(xì)胞株CNE-2，采用細(xì)胞因子MIF和HGF體外誘導(dǎo)CNE-2癌細(xì)胞，TUNEL法檢測細(xì)胞因子誘導(dǎo)前后癌細(xì)胞凋亡數(shù)量的變化，免疫組化染色和RT-PCR.法檢測相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)差異。 結(jié)果： (1)本研究收集的93例鼻咽癌病例標(biāo)本，男性67例(70.04﹪)，年齡30～75歲，平均47.2歲，中位年齡45歲；女性26例(29.96﹪)，年齡21～65歲，平均41.8歲

3、，中位年齡40.5；男∶女=2.58∶1。其中未分化型非角化性癌64例(68.82﹪)，分化型非角化性癌25例(26.88﹪)，角化性鱗狀細(xì)胞癌4例(4.30﹪)；93例鼻咽癌組織中，30.11﹪癌細(xì)胞呈Schrnincke型生長方式，36.56﹪呈Regaud型生長方式，混合型為33.33﹪。 (2)鼻咽癌組織中，癌細(xì)胞凋亡指數(shù)AI(Apoptosis Index，AI)變異較大(0-38/高倍視野)，平均8.55±9.30/

4、高倍視野。 (3)細(xì)胞因子MIF陽性表達(dá)率79.78﹪(71/89)，其中高表達(dá)率為69.66﹪。細(xì)胞因子HGF主要在癌巢周圍間質(zhì)的淋巴細(xì)胞中表達(dá)，陽性率74.12﹪(63/85)，其中高表達(dá)率為43.53﹪；25.88﹪(22/85)病例的癌細(xì)胞亦呈HGF陽性，但其高表達(dá)率僅為15.47﹪(13/85)，遠(yuǎn)低于HGF在間質(zhì)淋巴細(xì)胞中的表達(dá)(P=0.001)。89.88﹪(80/89)鼻咽癌組織中的癌細(xì)胞不同程度表達(dá)c-Met蛋

5、白，c-Met高表達(dá)率為75.28﹪。86.52﹪(77/89)Bcl-2表達(dá)陽性，高表達(dá)率為78.65﹪。94.44﹪，(85/90)p53表達(dá)陽性，高表達(dá)率為70.00﹪。78.65﹪(70/89)Bax表達(dá)陽性，高表達(dá)率為74.16﹪。 (4)細(xì)胞因子HGF在以Schmincke型生長方式的癌細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于以Regaud型方式生長的癌細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)，但與其他臨床病理指標(biāo)則均無明顯聯(lián)系。癌

6、細(xì)胞凋亡指數(shù)AI和其它相關(guān)蛋白也均未顯示與臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性(P值均大于0.05)。 (5)癌細(xì)胞MIF表達(dá)與凋亡指數(shù)AI呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r<,s>=0.418，P=0.000)，c-Met表達(dá)也顯示與AI的負(fù)相關(guān)性(r<,s>=0.278，P=0.011)，但其它蛋白均未顯示與AI的相關(guān)性(P值均大于0.05)。 (6)各蛋白間的相關(guān)關(guān)系分析顯示，MIF蛋白與Bcl-2呈正相關(guān)關(guān)系(r<,s>=0.286，P=0.00

7、7)。癌組織間質(zhì)中淋巴細(xì)胞表達(dá)的HGF與癌細(xì)胞表達(dá)的Bcl-2亦有正相關(guān)性(r<,s>=0.223，P=0.044)。c-Met蛋白與MIF顯著性相關(guān)(r<,s>=0.399，P=0.000)。 (7)CNE-2細(xì)胞株在細(xì)胞因子MIF刺激后，細(xì)胞凋亡數(shù)(56.70±4.04/1000細(xì)胞)與對照組(135.00±43.30/1000細(xì)胞)相比明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.035)；細(xì)胞因子HGF刺激后細(xì)胞凋亡數(shù)為40.70

8、±7.76/1000細(xì)胞，亦明顯少于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.020)。 (8)CNE-2細(xì)胞株在細(xì)胞因子MIF刺激后，Bcl-2陽性百分?jǐn)?shù)由9.33±5.77提高至73.33±5.77(P=0.000)；細(xì)胞因子HGF刺激后，Bcl-2陽性百分?jǐn)?shù)也增至63.33±5.77(P=0.000)。c-Met蛋白在CNE-2細(xì)胞株中的表達(dá)則由刺激前的66.67±5.77提高到細(xì)胞因子MIF刺激后的90.00±0.00(P=0.

9、002)和HGF刺激后的85.00±5.00(P=0.014)。但p53、Bax則在細(xì)胞因子刺激前后表達(dá)變化不明顯，無論細(xì)胞因子刺激與否，CNE-2細(xì)胞株均不表達(dá)HGF。 (9)RT-PCR結(jié)果顯示，CNE-2細(xì)胞株在細(xì)胞因子MIF和HGF刺激后，Bcl-2 mRNA水平均由225.58±24.67分別提高至475.18±49.94(P=0.000)和463.92±60.27(P=0.003)；c-Met mRNA也從444.0

10、4±71.32分別提高至627.69±112.10(P=0.047)和764.41±116.25(P=0.013)。但p53和Bax mRNA水平則未見明顯變化。CNE-2細(xì)胞株在細(xì)胞因子刺激前后均未能檢測到HGF mRNA表達(dá)。 結(jié)論： 1.細(xì)胞因子MIF在鼻咽癌癌細(xì)胞中高表達(dá)，但并非是影響癌細(xì)胞組織學(xué)分型等臨床病理特點(diǎn)的關(guān)鍵因素。 2.細(xì)胞因子HGF主要在鼻咽癌的淋巴間質(zhì)中表達(dá)，可能是癌細(xì)胞生長方式的影響因素