EB病毒DNA及EB病毒相關(guān)抗原抗體聯(lián)合診斷鼻咽癌的研究.pdf

1、研究背景： 鼻咽癌是發(fā)生于人鼻咽部的一種惡性腫瘤，主要分布于中國南方，在廣東省鼻咽癌的世界人口標(biāo)化發(fā)病率高達(dá)男30/10萬，女13/10萬。流行病學(xué)調(diào)查顯示廣東省四會(huì)地區(qū)、中山市和廣西蒼梧縣為鼻咽癌高發(fā)區(qū)。自從Old等發(fā)現(xiàn)了EB病毒與鼻咽癌的關(guān)系以來，就有很多學(xué)者提出通過檢測(cè)EB病毒的血清學(xué)標(biāo)志物來篩查早期鼻咽癌。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的日新月異，國內(nèi)外學(xué)者不斷提出新的診斷方法。近年來用于鼻咽癌診斷的血清學(xué)標(biāo)志物主要有針對(duì)EB病毒感

2、染細(xì)胞的殼抗原(VCA)抗體、早期抗原(EA)抗體，還有EB病毒特異性抗原標(biāo)記物如特異性膜抗原(LMP抗體)、相關(guān)核抗原1(EBNA1)抗體，EB病毒特異性DNase抗體等等。 目前，鼻咽癌篩查和監(jiān)測(cè)主要采用VCA/IgA和EA/IgA。但是，在我國南方進(jìn)行的大規(guī)模篩查結(jié)果顯示，VCA/IgA陽性人群中只有大約百分之十的人發(fā)展為鼻咽癌，大部分VCA/IgA陽性人群在十幾年的隨訪研究中沒有發(fā)展為鼻咽癌?？梢?，傳統(tǒng)的指標(biāo)VCA/Ig

3、A和EA/IgA診斷早期鼻咽癌存在很大的假陽性率。如何降低診斷的假陽性率，提高診斷的準(zhǔn)確度是近年研究的重點(diǎn)。 研究目的： 本研究的主要目的是評(píng)價(jià)EBV DNA及EBV相關(guān)抗體的診斷價(jià)值，比較各種聯(lián)合試驗(yàn)方法的診斷價(jià)值，探索最優(yōu)的早期診斷鼻咽癌的組合。 材料與方法： 本研究81例病例均來自中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院門診，經(jīng)病理確診的未經(jīng)治療的鼻咽癌病人，89例對(duì)照來自四會(huì)市篩查現(xiàn)場(chǎng)，經(jīng)初步檢查為健康人。分別檢測(cè)病例和

4、對(duì)照EBV DNA、VCA/IgA、EA/IgA、EBNA1/IgA、EBNA1/IgG和ZTA/IgG。采用巢式熒光定量PCR檢測(cè)EBV DNA，采用免疫酶法檢測(cè)VCA/IgA和EA/IgA，采用ELISA法檢測(cè)EBNA1/IgA、EBNA1/IgG和ZTA/IgG。 分別分析各指標(biāo)的靈敏度、特異度、約登指數(shù)以及預(yù)測(cè)價(jià)值。比較各指標(biāo)的ROC曲線下面積。采用聯(lián)合試驗(yàn)(并聯(lián)或者串聯(lián))的方式聯(lián)合各指標(biāo)，比較各種聯(lián)合的診斷價(jià)值。利用這

5、些指標(biāo)建立logistic回歸模型，以AIC為模型診斷的參數(shù)，并將預(yù)測(cè)概率作為診斷鼻咽癌的指標(biāo)，比較各種指標(biāo)組合綜合診斷鼻咽癌的診斷價(jià)值。模擬篩查人群，計(jì)算幾種選定方案的檢出率和假陽性率以及平均花費(fèi)，比較幾種組合的診斷效果。 采用SAS9.1軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Wilcoxon兩樣本檢驗(yàn)對(duì)病例組和對(duì)照組的DNA水平和抗體水平進(jìn)行比較。ROC曲線的繪制采用SAS軟件包中PROC LOGISTIC和PROC GPLOT過程

6、步，曲線下面積的比較采用SAS宏程序﹪ROC完成。ROC曲線下面積采用非參數(shù)方法(Bamber，1975)。部分圖形的繪制采用R軟件。多個(gè)指標(biāo)的聯(lián)合采用logistic回歸模型。 結(jié)果： 1．采用WilcoXon兩樣本檢驗(yàn)結(jié)果顯示各個(gè)指標(biāo)病例組與對(duì)照組差別均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同性別問各個(gè)指標(biāo)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)分析結(jié)果顯示EBV DNA與VCA/IgA、EA/IgA有相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.3127，0.335

7、0。VCA/IgA與EA/IgA的相關(guān)系數(shù)為0.8230。EBNA1/IgA與EBNA1/IgG的相關(guān)系數(shù)為0.4191。 2．單個(gè)指標(biāo)比較結(jié)果顯示VCA/IgA仍然具有最大的靈敏度(95.06﹪，cutoff=1：10)，EBNA1/IgG具有最大的特異度(95.51﹪，cutoff=1)。ROC分析顯示：EBNA1/IgA的曲線下面積最大，可能具有較大的診斷價(jià)值。EA/IgA的曲線下面積最小。 3．聯(lián)合試驗(yàn)結(jié)果顯示：

8、VCA/IgA與EA/IgA并聯(lián)仍然有較大的靈敏度和特異度。DNA與VCA/IgA、EA/IgA、EBNA1/IgA、EBNA1/IgG串聯(lián)時(shí)特異度均可達(dá)到100﹪。 DNA與VCA/IgA并聯(lián)時(shí)靈敏度可達(dá)到98.77﹪。DNA與EBNA1/IgG并聯(lián)時(shí)靈敏度可達(dá)到93.88﹪，特異度可達(dá)到86.52﹪。EBNAl/IgA與VCA/IgA串聯(lián)時(shí)特異度可達(dá)到96.63﹪，兩者并聯(lián)時(shí)可以檢出全部鼻咽癌。 4．運(yùn)用logistic回歸

9、模型綜合分析結(jié)果顯示：DNA與EBNA1/IgA結(jié)合，控制性別影響后建立的模型具有較好的擬合優(yōu)度，并且預(yù)測(cè)概率的ROC曲線下面積能達(dá)到0.98。 5．模擬篩查過程結(jié)果顯示，與其它方案相比，方案F4：第一步先用VCA/IgA檢查，陽性者進(jìn)行EBNA1/IgA檢測(cè)，兩者均為陽性者，定為陽性，懷疑為鼻咽癌，結(jié)果檢出率90﹪，假陽性率3.79﹪，平均檢出一例花費(fèi)約739元。 結(jié)論： 本研究為橫斷面研究，收集了一組確診未治

10、療的鼻咽癌病人和一組健康對(duì)照，檢測(cè)EBV相關(guān)的抗體和DNA。采用非參數(shù)的方法比較了病例和對(duì)照各個(gè)指標(biāo)的差別。對(duì)各項(xiàng)檢測(cè)計(jì)算診斷準(zhǔn)確度指標(biāo)，比較各檢測(cè)項(xiàng)目的診斷價(jià)值。 1．本研究結(jié)果顯示VCA/IgA、EA/IgA以及其它抗體的靈敏度和特異度與文獻(xiàn)研究相近，結(jié)果具有可信性。單個(gè)指標(biāo)DNA還不足以適合篩查鼻咽癌，原因有二，第一，此指標(biāo)存在約10﹪的假陽性率，其二，目前EBV DNA定量的費(fèi)用還比較昂貴，不適合大規(guī)模的人群篩查。

11、 2．EBNA1/IgA與VCA/IgA并聯(lián)可以將靈敏度提高到100﹪，特異度為84.27﹪。這樣的聯(lián)合結(jié)果與傳統(tǒng)的VCA/IgA與EA/IgA聯(lián)合相比，診斷價(jià)值有所提高。 3．綜合多個(gè)指標(biāo)建立Logistic回歸模型，利用預(yù)測(cè)概率進(jìn)行診斷可以達(dá)到較高的診斷價(jià)值，但是這種方式花費(fèi)較高，不適合于人群篩查，建議供臨床診斷參考。 4．模擬實(shí)際的篩查過程是一個(gè)考察篩查方案優(yōu)劣的好方法?？梢杂?jì)算出檢出率和假陽性率以及粗略的成本，