小鼠肝癌高低淋巴道轉(zhuǎn)移株差異基因表達(dá)譜分析及窖蛋白-1在淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者的主要死因。腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的闡明，對認(rèn)識腫瘤的生物學(xué)本質(zhì)具有理論意義。腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的方式包括直接播散、血道轉(zhuǎn)移、淋巴道轉(zhuǎn)移、種植轉(zhuǎn)移幾種。其中淋巴道轉(zhuǎn)移是最常見的方式，也是腫瘤轉(zhuǎn)移的早期跡象，因此及早發(fā)現(xiàn)微小的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶是控制腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。近年來對于腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的研究日益增多，很多淋巴道轉(zhuǎn)移相關(guān)分子陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，學(xué)者們希望通過這些分子作為突破點(diǎn)，尋找阻斷及治療腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的最佳手段。 為了探討這種來源相

2、同卻具有不同的生物學(xué)行為及特性的腫瘤細(xì)胞間在基因表達(dá)譜上的差異，本實(shí)驗(yàn)采用芯片技術(shù)篩選HCaF、HCaP的差異表達(dá)基因，旨在鑒別腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，并為基因治療尋找合適的靶位點(diǎn)。同時(shí)，在芯片顯示的差異表達(dá)基因中挑選8個(gè)基因，用RT-PCR及Westernblot進(jìn)行了驗(yàn)證。在這些差異基因中，我們進(jìn)一步對窖蛋白-1基因在一系列小鼠肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)及其在肝癌細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用進(jìn)行了研究。 RT-PCR及Westernblot的結(jié)

3、果顯示本實(shí)驗(yàn)采用的基因芯片重復(fù)性良好，質(zhì)量穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)采用Clonetech的基因芯片檢測了小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-F、Hca-P細(xì)胞中1185個(gè)基因的表達(dá)情況，篩選出69個(gè)差異表達(dá)基因。用Clonetech的結(jié)果分析軟件MicroarraySuitSoftware5.0.對Hca-F、Hca-P細(xì)胞兩張芯片進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)Hca-F、Hca-P細(xì)胞中差異在兩倍以上的基因(F/P＞2或F/P＜0.5)有69個(gè)，Hca-F表達(dá)上調(diào)的基因47個(gè)

4、，Hca-P表達(dá)上調(diào)的基因22個(gè)，3倍以上的16個(gè)，Hca-F表達(dá)上調(diào)的10個(gè)，Hca-P表達(dá)上調(diào)的6個(gè)。69個(gè)差異基因編碼的蛋白涉及到細(xì)胞生長的各個(gè)方面，包括細(xì)胞表面抗原、核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)蛋白、細(xì)胞粘附分子、載體蛋白、離子通道蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、細(xì)胞代謝相關(guān)蛋白、應(yīng)激反應(yīng)蛋白、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、死亡受體配體、RNA調(diào)節(jié)蛋白、生長因子及其受體、白細(xì)胞介素類生長因子、激素受體及各種受體、蛋白激酶、磷酸及磷酸化酶、鈣結(jié)合蛋白、基質(zhì)金屬

5、蛋白酶、細(xì)胞骨架蛋白、細(xì)胞周期蛋白、DNA損傷修復(fù)蛋白、DNA連接酶及各類細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)劑、效應(yīng)劑、調(diào)節(jié)劑，還有3個(gè)功能不明的蛋白，分別是5-azacytidineinducedgene1、crystallin，gammaS及programmedcelldeath4。在具有高淋巴道轉(zhuǎn)移潛能的Hca-F細(xì)胞中，生長因子受體類的癌基因、以及與細(xì)胞代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)合成等相關(guān)的基因明顯活躍，而在低轉(zhuǎn)移株中，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及與DNA損傷修復(fù)的基因

6、則表達(dá)上調(diào)，如誘導(dǎo)凋亡的TWEAK基因在低轉(zhuǎn)移株中表達(dá)上調(diào)，而在高轉(zhuǎn)移株中表達(dá)下調(diào)，證實(shí)腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移過程中基因改變的多樣性。 本研究通過基因芯片、半定量RT-PCR、蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)篩選出小鼠高低淋巴道轉(zhuǎn)移株的差異表達(dá)基因，這些基因在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移潛能的獲得中發(fā)揮著不同作用。雖然目前對大部分差異表達(dá)基因的功能還不了解，但已獲得的結(jié)果對淋巴道轉(zhuǎn)移的基因診斷、治療及研究等提供了有益的信息。同時(shí)，研究中發(fā)現(xiàn)窖蛋白-1在小鼠肝癌細(xì)