版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、珙桐為第三紀(jì)古熱帶植物區(qū)系的孑遺種,為國(guó)家一級(jí)保護(hù)珍稀瀕危植物,也是世界著名的觀賞木本花卉。到目前為止,關(guān)于珙桐宏觀研究的報(bào)道已有許多,但是關(guān)于珙桐分子方面的基礎(chǔ)研究相對(duì)缺乏。為了探討珙桐含有的特有種屬基因,保存珙桐的資源信息庫(kù),本論文實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了珙桐葉片組織全長(zhǎng)cDNA文庫(kù),并對(duì)文庫(kù)的質(zhì)量進(jìn)行了初步鑒定。
本論文實(shí)驗(yàn)以珙桐葉片為研究材料,采用Trizol法和Rneasy Plant Mini Kit法提取珙桐葉片組織總RN
2、A,檢測(cè)結(jié)果表明用Rneasy Plant Mini Kit法提取的效果較好?;诖私Y(jié)果本實(shí)驗(yàn)用Rneasy Plant Mini Kit法提取珙桐葉片總RNA為SMARTTM cDNA Library Construction Kit的起始材料合成全長(zhǎng)cDNA并連接到λTriplEx2載體上,Gigapack(R)Ⅲ Gold Packaging包裝重組λDNA。包裝好的噬菌體顆粒侵染E.coli XL1-Blue、BM25.8大腸桿
3、菌,成功構(gòu)建了珙桐葉片組織的cDNA文庫(kù)。
珙桐葉片總RNA反轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA,長(zhǎng)距離PCR方法合成雙鏈cDNA;PCR產(chǎn)物經(jīng)蛋白酶K消化后,用SfiI酶切;將酶切產(chǎn)物進(jìn)行分級(jí)分離,回收0.5kb以上的cDNA組分,并與入TriplEx2載體連接;連接產(chǎn)物經(jīng)體外蛋白包裝,產(chǎn)生原始文庫(kù);鑒定文庫(kù)的滴度和重組效率后,進(jìn)行文庫(kù)擴(kuò)增和保存。隨機(jī)挑取40個(gè)噬菌斑,用載體克隆位點(diǎn)兩端的通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以檢測(cè)所構(gòu)建的cDNA文
4、庫(kù)的質(zhì)量。經(jīng)測(cè)定該文庫(kù)初始滴度為6.3×106 pfu/ml,重組率為97.4%;擴(kuò)增后滴度為5.16×107pfu/ml;插入片段長(zhǎng)度為0.4~2.0kb。由于反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中采用附加序列的方法使全長(zhǎng)mRNA得到反轉(zhuǎn)錄,所以得到的cDNA是完整的,完全符合cDNA文庫(kù)的要求。通過(guò)對(duì)cDNA文庫(kù)的質(zhì)量檢測(cè),文庫(kù)中插入片段長(zhǎng)度的長(zhǎng)度、文庫(kù)的滴度以及重組率都符合cDNA文庫(kù)的要求。
珙桐葉片λ噬菌體cDNA文庫(kù)的成功構(gòu)建,為進(jìn)一步
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 玉米葉片cDNA文庫(kù)的構(gòu)建.pdf
- 辣椒葉片cDNA文庫(kù)構(gòu)建研究.pdf
- 福建柏葉片cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及EST分析.pdf
- 無(wú)患子葉片cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及EST分析.pdf
- 辣椒葉片響應(yīng)UV的cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及WRKY的cDNA的篩選.pdf
- 梨果實(shí)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建.pdf
- 黨參SSH與cDNA文庫(kù)構(gòu)建.pdf
- 蘋(píng)果果實(shí)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建.pdf
- 柑桔葉片干旱脅迫抑制差減cDNA文庫(kù)的構(gòu)建與初步分析.pdf
- 霜霉病菌誘導(dǎo)的黃瓜葉片cDNA文庫(kù)構(gòu)建及其表達(dá)序列標(biāo)簽(ESTs)分析.pdf
- Riboswitch cDNA體外組裝及相關(guān)文庫(kù)構(gòu)建.pdf
- 海藻糖生產(chǎn)菌cDNA文庫(kù)的構(gòu)建.pdf
- 骨膜cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及初步評(píng)價(jià).pdf
- 小麥全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)構(gòu)建、測(cè)序與分析.pdf
- 枳葉片抑制差減雜交cDNA文庫(kù)構(gòu)建及PtrBAM1基因抗寒功能鑒定.pdf
- 31193.海南特色動(dòng)物cdna文庫(kù)構(gòu)建及文庫(kù)篩選
- 野生茄子(Solanum torvum)葉片cDNA文庫(kù)構(gòu)建及耐鹽相關(guān)基因StBADH遺傳轉(zhuǎn)化番茄.pdf
- 人胚胎骨骼和關(guān)節(jié)RACE cDNA文庫(kù)構(gòu)建.pdf
- 西洋參根cDNA文庫(kù)構(gòu)建及鑒定.pdf
- 大青楊頂芽cDNA文庫(kù)構(gòu)建及ESTs分析.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論