2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、無(wú)患子(Sapindus mukorossi),作為集觀賞、藥用、材用和生態(tài)公益林樹(shù)種于一體的優(yōu)良樹(shù)種,無(wú)患子的開(kāi)發(fā)利用越來(lái)越受到大家的重視。本研究通過(guò)對(duì)三種提取RNA方法進(jìn)行比較,得到最適合提取無(wú)患子葉片總RNA的方法,同時(shí)建立了無(wú)患子葉片cDNA文庫(kù)并對(duì)EST片段進(jìn)行初步分析。主要結(jié)果如下:
  1、以無(wú)患子幼嫩葉片為材料,比較了CTAB法、RNAprep pure植物總RNA提取試劑盒法、Trizol法三種RNA提取方法的提

2、取效果。試驗(yàn)表明:CTAB法在三中種方法中是最不適合的,因?yàn)橛蠨NA的污染,而且RNA的濃度很??;天根試劑盒法的優(yōu)點(diǎn)是RNA的濃度和純度方面都很好,沒(méi)有蛋白質(zhì)等有機(jī)物和鹽類(lèi)等無(wú)機(jī)物的干擾,但是由于其提取的過(guò)程太過(guò)繁瑣,使得RNA的完整性不夠完美,稍有降解;Trizol法是最適合的方法,RNA的完整性很好,但是由于Trizol試劑成分的影響,胍類(lèi)等無(wú)機(jī)鹽成分殘留太多,不利于后面實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行,所以進(jìn)行純化處理,處理后結(jié)果符合構(gòu)建cDNA文庫(kù)的

3、要求。
  2、使用完整性好的高質(zhì)量 RNA通過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄合成雙鏈 cDNA,通過(guò) CHROMA SPIN+TE-1000柱收集片段>500bp片段與載體pSMART2IFD Linearized Vector連接,最后用電轉(zhuǎn)化法構(gòu)建了無(wú)患子葉片的cDNA文庫(kù)。最終得到原始文庫(kù)的滴度為2.9×106 cfu·mL-1,符合建庫(kù)的要求。文庫(kù)的重組率為91.4%,插入片段的長(zhǎng)度在0.3-1.5bp之間,擴(kuò)增文庫(kù)的滴度為5.64×1

4、07 cfu·mL-1。
  3、從cDNA文庫(kù)中隨機(jī)挑取253個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序,得到有效序列224條,經(jīng)過(guò)DNAMAN軟件編輯后,共有115393個(gè)堿基,其中GC堿基含量占總堿基數(shù)的48.9%,平均長(zhǎng)度為515.15bp。利用DNAstar軟件中的Seqman程序?qū)?24個(gè)序列進(jìn)行片段重疊群分析和拼接后得到89個(gè)contigs,其中包含41個(gè)singlets,文庫(kù)冗余度為60.27%。89個(gè)contigs中,高豐度基因5個(gè),中豐度

5、基因43個(gè),低豐度基因41個(gè),分別占總數(shù)的5.62%,48.31%,46.07%。
  4、89個(gè)contigs通過(guò)Blast2GO上的blast得到同源性序列62條,其中高度同源序列為39條,占總數(shù)的43.82%。剩余的26條中有17條通過(guò)NCBI的blastn程序可以比對(duì)到核酸,但其分值及相似度不滿足同源性要求,剩余9條未檢索到結(jié)果。有功能注釋的序列占47條。
  5、對(duì)EST序列進(jìn)行物種相似性分析,得到相似序列大部分物

6、種為植物,不過(guò)也有動(dòng)物,這也反映出生物界的物種之間存在著一定的關(guān)聯(lián)性。沒(méi)有檢索到與無(wú)患子相似,由此可以看出無(wú)患子的相關(guān)研究還很薄弱。
  6、利用Blast2GO對(duì)47條EST序列進(jìn)行GO功能注釋?zhuān)Y(jié)果表明:三大功能分類(lèi)的基因大致上都有,這不僅為后續(xù)的大規(guī)模測(cè)序的可行性提供了理論上的證據(jù),同時(shí)也為未來(lái)的研究提供了必要的線索。此外,通過(guò)GO level分析得出:47條獲得GO注釋的序列中每條序列都至少得到一個(gè)GO術(shù)語(yǔ),總共獲得注釋的

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