鹽酸?？颂婺釋?duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、舌癌(carcinoma of tongue)是口腔頜面部最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其生物學(xué)特性非常復(fù)雜，腫瘤發(fā)展快，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，愈后較差。提高舌癌治療療效的關(guān)鍵在于預(yù)防和選擇合理的綜合治療方案。近年來(lái)，一些新的方法及新模式相繼引入舌癌臨床治療，確立了以外科手術(shù)為主的舌癌綜合治療概念。分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展，使得腫瘤生物治療成為繼手術(shù)、放療、化療之后的第四種治療模式。而分子靶向藥物在多種實(shí)體瘤的臨床應(yīng)用，更充滿了生機(jī)和活力。表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨

2、酸激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase，EGFR-TK)抑制劑是新近出現(xiàn)的、對(duì)實(shí)體腫瘤確有療效的靶向治療藥物。鹽酸?？颂婺?克美納)是一種靶向表皮生長(zhǎng)因子受體的酪氨酸激酶抑制劑，有學(xué)者報(bào)道其在體外可抑制人表皮細(xì)胞癌(A431)、人胃腺癌細(xì)胞(BGC-823)的生長(zhǎng)增殖。但它對(duì)舌癌的作用如何，還未見(jiàn)有關(guān)研究報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)體外培養(yǎng)人舌鱗狀細(xì)胞癌(’ronguesquamou

3、s cell carcinoma)Tca8113細(xì)胞，采用不同濃度的鹽酸埃克替尼作用不同的時(shí)間，然后觀察腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞周期分布、細(xì)胞凋亡情況和細(xì)胞蛋白，如：細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白cyclinD<,1>、P<,27>、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)、上皮性鈣粘附蛋白(E-cadherin，E-cad)的表達(dá)變化。為進(jìn)一步了解酪氨酸激酶抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制提供有意義的試驗(yàn)資料

4、，為酪氨酸激酶抑制劑用于舌鱗狀細(xì)胞癌的治療提供依據(jù)。 目的 探討表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑鹽酸埃克替尼對(duì)體外培養(yǎng)的人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞的抑制作用及其可能機(jī)制。 材料與方法 1．人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞由上海交通大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院惠贈(zèng)。 2．鹽酸埃克替尼(克美納)由浙江貝達(dá)藥業(yè)有限公司惠贈(zèng)。 3．采用四甲基偶氮嘩鹽光吸收法(MTT法)檢測(cè)鹽酸?？颂婺嵩跐舛葹?μmol/

5、L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L時(shí)作用于人舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞后12h、24h、48h、72h、96h的細(xì)胞增殖情況，計(jì)算各組細(xì)胞的增殖抑制率。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)及形態(tài)學(xué)改變。 4．采用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期變化、檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。 5．采用間接免疫熒光聯(lián)合流式細(xì)胞技術(shù)及免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)鹽酸?？颂婺釋?duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞cyclinD<,1>、P<,27>、

6、MMP-9、E-cad蛋白表達(dá)的影響。 6．應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示，采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果 1．鹽酸?？颂婺釋?duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞增殖的抑制作用：同一時(shí)間點(diǎn)不同濃度鹽酸?？颂婺?5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的抑制作用，隨濃度增加而增強(qiáng)(P<0.

7、01)；同一濃度鹽酸埃克替尼在不同時(shí)間點(diǎn)(12h、24h、48h、72h、96h)對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的抑制作用，隨時(shí)間增加而增強(qiáng)(P<0.01)?？偟膩?lái)說(shuō)，鹽酸埃克替尼對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用具有劑量和時(shí)間依賴性。 2．鹽酸埃克替尼對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡的影響表現(xiàn)在：隨鹽酸?？颂婺釢舛?、作用時(shí)間的增加，G<,0>/G<,1>期細(xì)胞比例逐漸增加，細(xì)胞凋亡率增加。統(tǒng)計(jì)顯示其G<,0

8、>/G<,1>期阻滯作用及細(xì)胞凋亡率均與濃度、作用時(shí)間成正相關(guān)。 3．鹽酸埃克替尼作用于人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞后cyclinD<,1>、MMP-9陰性表達(dá)；P<,27>、E-cad陽(yáng)性表達(dá)。 結(jié)論 1．鹽酸?？颂婺崮芤种迫松圜[癌Tca8113細(xì)胞的增殖，其抑制作用具有時(shí)間和濃度依賴性。 2．鹽酸埃克替尼能改變?nèi)松圜[癌Tca8113細(xì)胞的細(xì)胞周期分布，有明顯的G<,0>/G<,1>期阻滯作用，并誘導(dǎo)細(xì)胞