淋巴瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性表面標(biāo)記的研究.pdf

1、第一部分淋巴瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)方法的建立 [目的] 聯(lián)合應(yīng)用激光顯微切割(LCM)技術(shù)及基因芯片(cDNAmicroarray)技術(shù)研究淋巴瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性表面標(biāo)記。 [方法] 選擇鋅固定液固定新鮮淋巴結(jié)組織，進(jìn)行CD34快速免疫組化染色標(biāo)出血管內(nèi)皮細(xì)胞，激光顯微切割血管內(nèi)皮細(xì)胞并提取細(xì)胞總RNA進(jìn)行體外兩輪線性擴(kuò)增后進(jìn)行cDNAmicroarray。 [結(jié)果] 1、鋅固

2、定劑可以有效保存組織RNA并不影響快速免疫組化染色。 2、可在半小時(shí)內(nèi)成功進(jìn)行CD34快速免疫組化染色。 3、LCM切割獲得的3000血管內(nèi)皮細(xì)胞可以提取納克級(jí)總RNA。 4、經(jīng)過(guò)兩輪體外線性擴(kuò)增，可以獲得足夠數(shù)量RNA送檢cDNAmicroarray。 [結(jié)論] LCM和cDNAmicroarray技術(shù)可以聯(lián)合應(yīng)用于研究淋巴瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性表面標(biāo)記。 第二部分驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) [目的

3、] 對(duì)淋巴瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性表面標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證。 [方法] 通過(guò)擴(kuò)增VEC特異性標(biāo)記CD34及B淋巴細(xì)胞標(biāo)記B19檢測(cè)LCM切割細(xì)胞的精確度；采用半定量PCR方法以擴(kuò)增前后的RNA各1μl作為模板檢測(cè)RNA體外擴(kuò)增的有無(wú)偏差性；應(yīng)用配對(duì)散點(diǎn)圖分析Microarry的可重復(fù)性；應(yīng)用原位雜交技術(shù)對(duì)Microarry的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。 [結(jié)果] LCM切割細(xì)胞具有較高精確度，RNA體外擴(kuò)增的無(wú)偏