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1、目的:完善血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法,觀察其生長(zhǎng)規(guī)律及生物學(xué)特性;探討重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞作用的機(jī)理。 方法:用組織塊法培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞體,待長(zhǎng)成單層細(xì)胞以后傳代,建立血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞系,觀察其增殖特征,繪制生長(zhǎng)曲線,并用第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原進(jìn)行鑒定。重組人血管內(nèi)皮抑制素作用于血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞后,在24、48、72小時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)下觀察其形態(tài)變化,采用四甲基偶氮唑鹽溶液法檢測(cè)不同濃度重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)
2、胞增殖的抑制作用,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞早期凋亡的影響。 結(jié)果: 1.培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞于4天后開(kāi)始貼壁生長(zhǎng),一周后只有少量細(xì)胞鋪展貼壁生長(zhǎng),兩周后開(kāi)始生長(zhǎng)分裂,三周后細(xì)胞開(kāi)始快速生長(zhǎng),四周后,細(xì)胞鋪滿(mǎn)板底。用相差倒置顯微鏡觀察,發(fā)現(xiàn)所分離的內(nèi)皮細(xì)胞呈上皮細(xì)胞形態(tài)。培養(yǎng)細(xì)胞第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原表達(dá)為陽(yáng)性。 2.重組人血管內(nèi)皮抑制素作用后,光鏡下可見(jiàn)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生彌散性壞死,四甲基
3、偶氮唑鹽溶液法檢測(cè)顯示,在24h,48h,72h處理組吸光度值隨藥物濃度的增加均降低,差異具有顯著性(P<0.05),與低濃度組(15.625ug/ml)比較,較高濃度組具有同樣的變化趨勢(shì)(P<0.05);抑制率隨藥物濃度和作用時(shí)間的增加而遞增。 3.流式細(xì)胞術(shù)顯示隨著藥物濃度的增加血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的早期凋亡率逐漸上升,差異有顯著性(P<0.05),與低濃度組(15.625ug/ml)比較,較高濃度組具有同樣的變化趨勢(shì)(P<0.0
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