血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特性和重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：完善血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，觀察其生長(zhǎng)規(guī)律及生物學(xué)特性；探討重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞作用的機(jī)理。 方法：用組織塊法培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞體，待長(zhǎng)成單層細(xì)胞以后傳代，建立血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞系，觀察其增殖特征，繪制生長(zhǎng)曲線，并用第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原進(jìn)行鑒定。重組人血管內(nèi)皮抑制素作用于血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞后，在24、48、72小時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)下觀察其形態(tài)變化，采用四甲基偶氮唑鹽溶液法檢測(cè)不同濃度重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)

2、胞增殖的抑制作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞早期凋亡的影響。 結(jié)果： 1．培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞于4天后開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，一周后只有少量細(xì)胞鋪展貼壁生長(zhǎng)，兩周后開(kāi)始生長(zhǎng)分裂，三周后細(xì)胞開(kāi)始快速生長(zhǎng)，四周后，細(xì)胞鋪滿(mǎn)板底。用相差倒置顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)所分離的內(nèi)皮細(xì)胞呈上皮細(xì)胞形態(tài)。培養(yǎng)細(xì)胞第Ⅷ凝血因子相關(guān)抗原表達(dá)為陽(yáng)性。 2．重組人血管內(nèi)皮抑制素作用后，光鏡下可見(jiàn)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生彌散性壞死，四甲基

3、偶氮唑鹽溶液法檢測(cè)顯示，在24h，48h，72h處理組吸光度值隨藥物濃度的增加均降低，差異具有顯著性（P<0．05），與低濃度組（15．625ug/ml）比較，較高濃度組具有同樣的變化趨勢(shì)（P<0．05）；抑制率隨藥物濃度和作用時(shí)間的增加而遞增。 3．流式細(xì)胞術(shù)顯示隨著藥物濃度的增加血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的早期凋亡率逐漸上升，差異有顯著性（P<0．05），與低濃度組（15．625ug/ml）比較，較高濃度組具有同樣的變化趨勢(shì)（P<0．0