編碼人CD20的Ad載體誘發(fā)抗小鼠淋巴瘤特異性免疫的研究.pdf

1、免疫治療在淋巴瘤的治療中占有顯著的地位。利普昔單抗(Rituximab，美羅華)在臨床上的應(yīng)用顯著地改善了CD20+的B細(xì)胞淋巴瘤患者的預(yù)后。但美羅華單抗在體內(nèi)產(chǎn)生的是被動免疫，而在抗腫瘤免疫中，主要還是應(yīng)以主動性的細(xì)胞免疫為主。另有研究表明，用同源異種的腫瘤相關(guān)抗原能有效地打破自身腫瘤抗原誘導(dǎo)的免疫耐受。因此，用同源異種的腫瘤抗原修飾樹突狀細(xì)胞(Dendriticcells，DC)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫，從而達(dá)到治療腫瘤的目的將是腫

2、瘤治療的一種有效策略。本研究旨在探討編碼人CD20(hCD20)基因的腺病毒載體感染DC作為疫苗免疫小鼠，對CD20<'+>淋巴瘤小鼠的保護(hù)作用。 采用RT-PCR的方法將hCD20基因從人外周血中克隆出來并將該基因cDNA片段插入腺病毒穿梭質(zhì)粒中，采用Ad Max<'TM>腺病毒載體包裝體系，構(gòu)建Ad5/35hCD20。同時構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)小鼠CD20(mCD20)的B16.F10細(xì)胞，模擬CD20陽性的淋巴瘤細(xì)胞。用Ad5/35

3、 hCD20感染C57BL/6小鼠骨髓來源的DC<'[1]>，感染劑量為100 pfu/DC，以每只小鼠5×10<'5>DC皮下注射免疫同基因小鼠，每周一次，連續(xù)兩次，并以d1 70-3感染的DCs作為對照，以相同方式免疫小鼠。免疫結(jié)束后一周，以mCD20<'+>B16.F10細(xì)胞作為靶細(xì)胞，免疫后小鼠的脾細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，用乳酸脫氫酶釋放法進(jìn)行體外細(xì)胞毒性實驗檢測抗原特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)；以同樣的方式兩次DC免疫后一周，皮下接種mCD2

4、0<'+>B16.F10細(xì)胞(2×10<'5>細(xì)胞/小鼠)建立小鼠淋巴瘤荷瘤模型，觀察Ad5/35 hCD20免疫小鼠后的免疫保護(hù)作用。 體外細(xì)胞毒實驗結(jié)果顯示：Ad5/35 hCD20免疫小鼠能誘導(dǎo)特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的產(chǎn)生，其CTL殺傷率與效靶比有關(guān)，在效靶比為100：1、50：1和25：1情況下，實驗組的殺傷率分別為73.9％±7.6％、57.7％±8.8％和26.7％±3.1％，對照組的殺傷率分別為17.

5、4％±0.8％、12.8％±2.9％和9.1％±1.0％。荷瘤實驗顯示，對照組小鼠在接種mCD20<'+>B16.F10細(xì)胞后兩周左右全部成瘤，而實驗組小鼠觀察4周其成瘤率為30％；且實驗組小鼠的腫瘤體積明顯小于對照組。繼續(xù)觀察至2個月，實驗組剩余的小鼠仍無腫瘤生長，提示Ad5/35hCD20能產(chǎn)生抗小鼠淋巴瘤的特異性免疫，對CD20+的淋巴瘤小鼠有保護(hù)作用。本研究證實，用腺病毒載體介導(dǎo)的同源異種CD20(人CD20)能有效地打破腫瘤免