特異性抑制β-catenin活性對套細(xì)胞淋巴瘤Jeko-1細(xì)胞株增殖、凋亡的研究.pdf

1、目的：研究β-catenin和p-GSK-3β在套細(xì)胞淋巴瘤的表達(dá)及意義，并特異性抑制β-catenin觀察對套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的增殖和凋亡的影響；
　　方法：免疫組織化學(xué)方法檢測β-catenin蛋白、p-GSK-3β蛋白在套細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)差異。應(yīng)用短發(fā)夾人β-catenin的基因shRNA經(jīng) LipofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染Jeko-1細(xì)胞；RT-PCR、Western blot的方法鑒定干擾效果。應(yīng)用四唑鹽

2、（MTT）法繪制細(xì)胞生長曲線，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞調(diào)亡；Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、CyclinD1、C-myc、caspase3表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：β-catenin套細(xì)胞淋巴瘤異常表達(dá)明顯升高為73.33％（22/30），對照組僅6.7%(2/30)，有顯著性差異，p<0.05；p-GSK-3β在套細(xì)胞淋巴瘤陽性率為66.67%（20/30），顯著高于對照組16.67%（5/30），p<0

3、.05。Spearman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，二者存在明顯的正相關(guān)，r=0.852，p＜0.01。β-catenin shRNA轉(zhuǎn)染Jeko-1細(xì)胞48h后，RT-PCR、Western blot檢測發(fā)現(xiàn)β-catenin的mRNA和蛋白表達(dá)下降。細(xì)胞增殖率為(45.37±3.16)%，明顯低于對照組(94.41±2.46)%、(98.21±0.39)%，p<0.05；細(xì)胞凋亡率為(39.46±3.82)%、高于對照組(4.37±1.57)%、

4、(3.26±1.26)%，p<0.05。同時凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、CyclinD1、C-myc的表達(dá)下降，而Bax、caspase3表達(dá)上升。β-catenin特異性抑制劑XAV939能濃度依賴性抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，p<0.05。
　　結(jié)論：套細(xì)胞淋巴瘤存在β-catenin、p-GSK-3β蛋白的異常表達(dá)，提示可能與套細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生有關(guān)。β-catenin shRNA真核表達(dá)載體，可以有效地干擾Jeko-1細(xì)胞中β-