環(huán)孢霉素A誘導(dǎo)糖代謝紊亂及參與慢性移植物腎?。–AN）的機(jī)制探討.pdf

1、目前，器官移植作為終末期疾病治療的有效手段之一，已在臨床得到廣泛應(yīng)用。然而，由于各種免疫與非免疫因素的存在，移植物將逐漸喪失其功能，稱為慢性移植物腎病（chronic allograft nephropathy，CAN）或慢性移植物失功（chronic graft dysfunction，CGD），CAN已成為威脅接受移植患者生命的主要因素。近年來，各種非免疫因素在參與CAN發(fā)生發(fā)展中的作用日益得到重視，包括移植后糖尿?。╬ost-tr

2、ansplant diabetesmellitus，PTDM）、肥胖、血脂代謝異常、高血壓、感染等，其中，PTDM是引起移植腎CAN的重要原因之一。 CAN的腎臟病理改變包括動(dòng)脈、腎小管、腎間質(zhì)和腎小球的慢性病變，間質(zhì)纖維化是CAN的核心病變。長期以來，對(duì)PTDM引起的腎臟病變的研究一直集中在腎小球，而占據(jù)整個(gè)腎臟總體積90％以上的腎小管卻未得到應(yīng)有的重視。事實(shí)上，腎小管上皮細(xì)胞在PTDM腎病的發(fā)生發(fā)展中占據(jù)著相當(dāng)重要的地位。糖

3、尿病高糖血癥本身是腎臟損害并喪失功能的重要原因，腎移植后，免疫抑制劑的應(yīng)用又是誘發(fā)高糖血癥的危險(xiǎn)因素。而移植術(shù)后免疫抑制劑環(huán)孢霉素A（Ciclosporin A,CsA）的應(yīng)用，能否直接誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞周圍環(huán)境的高糖化或影響細(xì)胞對(duì)糖的攝取及利用；在高糖情況下，腎小管上皮細(xì)胞是否參與腎臟纖維化進(jìn)程，以及其發(fā)揮上訴致病作用的機(jī)制尚不完全清楚。本實(shí)驗(yàn)即對(duì)此進(jìn)行研究，探討CsA對(duì)腎小管上皮細(xì)胞糖代謝的影響，高糖環(huán)境對(duì)腎小管上皮細(xì)胞TGF-β1

4、、CTGF、Smad蛋白和膠原分泌的影響，這有助于闡明移植術(shù)后CsA的應(yīng)用與慢性移植物腎病的發(fā)生間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果摘錄如下： 1．對(duì)于使用不同濃度CsA培養(yǎng)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞株NRK52E，采用液體閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè)量<'3>H-葡萄糖攝取量的方法來反映其對(duì)葡萄糖的攝取情況。結(jié)果顯示腎小管上皮細(xì)胞NRK52E對(duì)周圍葡萄糖的吸收隨時(shí)間而增加，于60分鐘達(dá)到峰值。高濃度的CsA處理后的NRK52E細(xì)胞較之低濃度的CsA組葡萄糖攝取能力下

5、降（P＜0.05），各實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組細(xì)胞相比，葡萄糖攝取能力均有所下降（P＜0.05）。提示免疫抑制劑CsA能抑制腎小管上皮細(xì)胞NRK52E對(duì)葡萄糖的攝取。 2．采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和間接免疫熒光化學(xué)染色方法，檢測(cè)高糖環(huán)境對(duì)NRK52E細(xì)胞TGF-β1、CTGF、Smad蛋白（Smad3、7）、膠原蛋白（Collagen Type I和Collagen Type IV,Col I和CoI IV）mRNA和蛋

6、白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示高糖環(huán)境（含50mmol/L葡萄糖）培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞7天后，細(xì)胞表達(dá)FGF-β1mRNA及蛋白含量明顯增加（P＜0.05）；培養(yǎng)14天和28天后，細(xì)胞TGF-β1mRNA及蛋白含量比培養(yǎng)7天組有所下降，但與對(duì)照組（含25mmol/L葡萄糖）相比其差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；高糖環(huán)境培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞7天、14天和28天，細(xì)胞表達(dá)CTGF mRNA及蛋白的含量明顯升高（P＜0.05），各組與對(duì)照組相比差別

7、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），免疫熒光化學(xué)顯示其表達(dá)以細(xì)胞漿為主，長期高糖的誘導(dǎo)使CTGF產(chǎn)生向核周聚集的趨勢(shì)；高糖環(huán)境培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞7天、14天和28天，Smad 3和Smad7 mRNA及蛋白的表達(dá)與對(duì)照組相比均有所提高（P＜0.05），且隨時(shí)間延長，Smad 3和Smad7 mRNA及蛋白的表達(dá)呈上升趨勢(shì)；高糖培養(yǎng)的NRK52E細(xì)胞在7天、14天和28天，其ColI和ColIV的表達(dá)與對(duì)照組相比明顯提高（P<0．05），隨時(shí)

8、間延長，二者的表達(dá)呈上升趨勢(shì)，其中ColI的表達(dá)增加的幅度大于ColIV的表達(dá)。說明長期的高糖環(huán)境可刺激腎小管上皮細(xì)胞分泌TGF-β1和CTGF，同時(shí)在整個(gè)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)中可能有Smad家族的參與（Smad3和Smad7的含量增加），最終細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）堆積，導(dǎo)致腎臟纖維化和CAN。 綜上所述，在移植術(shù)后PTDM和CGD／CAN的發(fā)生發(fā)展過程中，CsA可引起腎小管上皮細(xì)胞糖攝取能力下降