慢性移植腎腎病移植腎纖維化機(jī)制的研究.pdf

1、臨床背景在過去的二十年里，尸體及親屬供腎移植腎的1年存活率已經(jīng)普遍超過80％及90％，這些成就歸功于我們對(duì)移植免疫學(xué)理解的加深和良好的組織配型、器官保存及普樂可復(fù)、環(huán)孢霉素等更強(qiáng)、更具選擇性的免疫抑制劑的應(yīng)用。雖然普樂可復(fù)和環(huán)孢霉素的應(yīng)用減少了急性排斥反應(yīng)的發(fā)生率及嚴(yán)重程度，然而在過去的十年里的應(yīng)用證明它們對(duì)于治療移植腎慢性功能衰竭并沒有多大效果，而且移植腎的半數(shù)存活率也沒有明顯提高。近50％的移植腎在移植后十年左右即出現(xiàn)移植腎功能衰竭

2、而要重新進(jìn)行血透或接受再移植。引起遠(yuǎn)期移植腎功能衰竭的最常見原因是慢性移植腎腎病，它所引起的移植腎功能衰竭的例數(shù)占腎移植1年后因?yàn)楦鞣N原因發(fā)生移植腎功能衰竭總例數(shù)的50-80％。而慢性移植腎腎病最主要的特征就是移植腎的纖維化，所以研究慢性移植腎腎病移植腎纖維化的機(jī)制已是當(dāng)前刻不容緩的課題。 目的研究慢性移植腎腎病(CAN)移植腎組織病理學(xué)特點(diǎn)及血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1R)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、Ⅳ型膠原(Col

3、lagenⅣ)在慢性移植腎病移植腎纖維化中的作用及其三個(gè)因子之間的相互間關(guān)系，分析慢性移植腎腎病移植腎纖維化的機(jī)制，為臨床治療慢性移植腎腎病提供方向及相應(yīng)理論依據(jù)。 方法收集19例經(jīng)病理明確為診斷慢性移植腎腎病并行移植腎切除的移植腎標(biāo)本?；颊邽樾型N異體腎移植術(shù)后1～11年移植腎失功者，平均移植腎存活時(shí)間為4.4年，其中男性9例，女性10例，年齡20～55歲。11例采用以CsA為基礎(chǔ)的免疫抑制治療方案，8例采用FK506治療。以

4、10例正常腎組織作為對(duì)照組，其中6例為外傷后行腎切除者，4例為腎癌根治術(shù)癌旁5cm以外正常組織石蠟標(biāo)本，年齡24～45歲。29例標(biāo)本均制成蠟塊，同時(shí)進(jìn)行HE染色、PASM染色和Masson染色。同時(shí)對(duì)移植腎組織標(biāo)本按照Banff97病理診斷分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理診斷及分級(jí)，病理診斷分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級(jí)輕度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變，Ⅱ級(jí)中度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變，Ⅲ級(jí)重度間質(zhì)纖維化和腎小管

5、萎縮、消失伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變。接著，所有標(biāo)本均用免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)AT1R、TGF-β1及CollagenⅣ的表達(dá)，圖像分析方法采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告分析系統(tǒng)，通過光學(xué)顯微鏡放大200倍攝取并分析圖像。每例隨機(jī)取腎小球數(shù)10個(gè)，腎小管隨機(jī)視野取10個(gè)，每例腎小管總數(shù)大于60個(gè)。對(duì)所選視野中的陽(yáng)性信號(hào)進(jìn)行圖像分析，用半定量法估計(jì)各因子表達(dá)情況：在免疫組化標(biāo)本中，計(jì)算每個(gè)腎小球陽(yáng)性著色的面積及

6、整個(gè)腎小球面積，以兩者的比值表示每種成分在腎小球中的含量，計(jì)算每例切片上所有腎小球各比值的均值，以此值代表此例患者某種成分在腎小球中的相對(duì)含量。同樣，計(jì)算每個(gè)視野中腎小管和腎間質(zhì)陽(yáng)性著色面積和視野總面積比值，取其均值代表此例患者某種成分在腎小管和間質(zhì)的相對(duì)含量。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，AT1R、TGF-β1或Ⅳ型膠原在CAN組與正常腎組織中表達(dá)的比較采用Mann-WhitneyTest，各CAN病理分級(jí)間

7、比較采用NemenyiTest，AT1R、TGF-β1與Ⅳ型膠原三者間兩兩關(guān)系采用Spearman法，取雙側(cè)，P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。 結(jié)果慢性移植腎腎病移植腎病理組織學(xué)改變主要表現(xiàn)為腎小球不同程度萎縮、纖維化、玻璃樣變，間質(zhì)不同程度的纖維化和淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，小動(dòng)脈內(nèi)膜增厚、纖維化、玻璃樣變，部分管腔狹窄或閉塞，腎小管不同程度的萎縮，排列較紊亂，部分髓質(zhì)的集合管擴(kuò)張，可見較多的蛋白管型等。同時(shí)AT1R、TGF-β

8、1和Ⅳ型膠原SABC法染色表明，正常腎組織中AT1R在血管平滑肌細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞有弱陽(yáng)性表達(dá)；TGF-β1著色主要位于腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞漿，多呈弱陽(yáng)性表達(dá)；Ⅳ型膠原主要分布在腎小球、腎小管基底膜及包曼氏囊壁和系膜區(qū)，腎間質(zhì)中少量散在分布，腎小管上皮細(xì)胞中未見表達(dá)。而慢性移植腎腎病移植腎組織中AT1R在腎小球、腎小管上皮細(xì)胞胞膜、血管平滑肌細(xì)胞、血管周圍及腎間質(zhì)，表達(dá)較正常腎組織明顯增加；Ⅳ型膠原除在腎小球、腎小管基底膜及包曼氏囊壁和

9、系膜區(qū)的表達(dá)較正常腎組織有不同程度增加外，在腎間質(zhì)中分布亦增加十分明顯，腎小管上皮細(xì)胞中則無(wú)表達(dá)；TGF-β1則在腎小管上皮細(xì)胞胞漿和胞膜多呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，部分腎小球包曼氏囊壁亦有表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析資料后表明AT1R、TGF-β1和Ⅳ型膠原在CAN組腎小球及腎小管、間質(zhì)的表達(dá)比正常腎組織明顯增多，兩者間差異均有顯著性(p值均＜0.01)，且AT1R、TGF-β1和Ⅳ型膠原的表達(dá)隨CAN病理分級(jí)的加重而增加的趨勢(shì)；AT1R和TGF-β1兩者分

10、別在CAN腎小球及腎小管間質(zhì)中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.843，p＜0.01及r=0.836，p＜0.01)。TGF-β1和Ⅳ型膠原兩者分別在CAN腎小球及腎小管間質(zhì)中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.943，P＜0.01及r=0.910，P＜0.01)。 結(jié)論慢性移植腎腎病移植腎病理組織學(xué)改變主要表現(xiàn)為腎小球硬化、腎小管萎縮、間質(zhì)纖維化、血管內(nèi)膜增生和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)積聚是腎纖維化的主要病理基礎(chǔ)。ECM的主要成分是膠原纖

11、維(Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原)、非膠原性糖蛋白(層黏連蛋白、纖維連接蛋白等)、彈性蛋白、蛋白多糖和氨基聚糖。在腎臟組織中，Ⅳ型膠原是主要的膠原成分，本實(shí)驗(yàn)表明CAN中Ⅳ型膠原表達(dá)有隨CAN病理分級(jí)增加而增多的趨勢(shì)，Ⅳ型膠原的表達(dá)程度反映了移植腎纖維化的程度，證實(shí)Ⅳ型膠原的沉積是移植腎纖維進(jìn)程中的一個(gè)重要因素，提示應(yīng)用抑制Ⅳ型膠原的產(chǎn)生或促使其降解的藥物可能起到延緩其纖維化進(jìn)程的作用。而TGF-β是一種很強(qiáng)的纖維發(fā)生細(xì)胞因子，它與一些慢性腎臟及其

12、它臟器疾病的纖維化密切相關(guān)。本研究表明TGF-β1在CAN的移植腎組織中呈高表達(dá)，并隨CAN病理分級(jí)的增加有增多的趨勢(shì)，同時(shí)它和Ⅳ型膠原的表達(dá)呈正相關(guān)，提示TGF-β1可能通過調(diào)控移植腎組織中Ⅳ型膠原等成分的變化引起移植腎的纖維化，說(shuō)明TGF-β1在CAN纖維化進(jìn)程中的重要的意義。同時(shí)本研究表明CAN移植腎組織AT1R呈高表達(dá)，且隨CAN病理分級(jí)加重有增加的趨勢(shì)，同時(shí)AT1R的表達(dá)與TGF-β1的表達(dá)呈正相關(guān)。這說(shuō)明移植腎組織中AT1R

13、異常過度增加，在與ATⅡ結(jié)合后，引起TGF-β1表達(dá)增加，最后導(dǎo)致移植腎纖維化，在CAN的移植腎纖維化進(jìn)程中起著重要的作用。洛沙坦(1osartan，LOS)是一種AT1R的拮抗劑，CampistolJM[13]和el-AgroudyAE[14]等用洛沙坦治療CAN的患者，除產(chǎn)生顯著的降壓及減輕蛋白尿的作用，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)其能顯著降低TGF-β血漿水平。同時(shí)這也從另一個(gè)方面說(shuō)明ATⅡ與AT1受體結(jié)合會(huì)促進(jìn)了TGF-β的生成。但ACEⅠ類或A