IL-12單克隆抗體阻斷DC上清誘導(dǎo)FBL-3細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立體外培養(yǎng)擴(kuò)增C57BL/6小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）的方法；應(yīng)用反復(fù)凍融法制備小鼠紅白血病FBL-3腫瘤細(xì)胞抗原并致敏DC：觀察致敏DC培養(yǎng)上清對(duì)小鼠紅白血病細(xì)胞FBL-3的誘導(dǎo)分化作用；觀察IL-12單克隆抗體阻斷致敏DC培養(yǎng)上清對(duì)小鼠紅白血病細(xì)胞FBL-3的誘導(dǎo)分化作用；進(jìn)而探討DC培養(yǎng)上清誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化作用的機(jī)制，為白血病的誘導(dǎo)分化治療提供一條新的途徑。 方法：①應(yīng)用1ng/ml白介

2、素-4（interleukin，IL-4）和10ng/ml粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)C57BL/6小鼠骨髓細(xì)胞，光鏡和電鏡觀察DC發(fā)育過(guò)程中形態(tài)學(xué)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表面分子CD80、CD86、H-2Kb及I-Ab的表達(dá)情況；②常規(guī)培養(yǎng)并收集C57BL/6小鼠誘導(dǎo)的紅白血病FBL-3細(xì)胞，反復(fù)凍融FBL-3

3、細(xì)胞制備腫瘤抗原，收集備用；③制備的FBI-3腫瘤抗原與培養(yǎng)的C57BL/6小鼠DC共孵育，致敏DC：④用ELISA法檢測(cè)致敏DC第8天培養(yǎng)上清中IL-12的濃度（細(xì)胞濃度2．0×106/ml）；⑤分四組：標(biāo)準(zhǔn)IL-12組（陽(yáng)性對(duì)照組，A組），致敏DC第8天的培養(yǎng)上清組（致敏DC組，B組），加入IL-12單克隆抗體的致敏DC第8天的培養(yǎng)上清組（阻斷實(shí)驗(yàn)組，C組），RPMI-1640組（陰性對(duì)照組，D組）。四組分別與FBL-3細(xì)胞共孵育7

4、2小時(shí)后，用瑞氏染色計(jì)數(shù)成熟單核細(xì)胞、透射電鏡觀察成熟細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面CD14分子的陽(yáng)性表達(dá)率，觀察四組有何不同。 結(jié)果：①用IL-4和GM-CSF聯(lián)合培養(yǎng)C57BIL/6小鼠骨髓細(xì)胞，可得到符合DC特征的典型細(xì)胞；②ELISA法檢測(cè)致敏DC培養(yǎng)第8天DC（細(xì)胞濃度2．0×106/ml）上清中IL-12的濃度為：（699．77±16．67）pg/ml；③瑞氏染色計(jì)數(shù)成熟單核細(xì)胞的比率：陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)化率為（3

5、．06±1．41）％，阻斷實(shí)驗(yàn)組單核細(xì)胞比率為（17．11±1．25）％，兩者比較P<0．05；致敏DC組單核細(xì)胞比率為（46．03_+2．41）％，與陰性對(duì)照組和阻斷實(shí)驗(yàn)組比較P均<0．05；陽(yáng)性對(duì)照組單核細(xì)胞比率（48．07±1．96）％，與陰性對(duì)照組和阻斷實(shí)驗(yàn)組比較P均<0．05，與致敏DC組比較P>0．05；④透射電鏡計(jì)數(shù)成熟單核細(xì)胞的比率與瑞氏染色計(jì)數(shù)成熟單核細(xì)胞的比率基本相同；⑤流式細(xì)胞儀分析顯示：陰性對(duì)照組細(xì)胞基本無(wú)CD1

6、4表達(dá)，表達(dá)率為（3．24±1．39）％；陽(yáng)性對(duì)照組、致敏DC組、阻斷試驗(yàn)組作用后均有部分細(xì)胞表達(dá)CD14分子，CD14陽(yáng)性率分別為（49．39±1．88）％、（48．28±1．10）％、（18．02±0．92）％。致敏DC組和陽(yáng)性對(duì)照組比較P>0．05：致敏DC組、陽(yáng)性對(duì)照組分別與陰性對(duì)照組、阻斷試驗(yàn)組比較P<0．05；阻斷試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組比較P<0．05。 結(jié)論：①應(yīng)用IL-4聯(lián)合GM．CSF培養(yǎng)小鼠骨髓細(xì)胞，可大量擴(kuò)增成