雞白細(xì)胞介素6基因的克隆及對(duì)新城疫LaSota疫苗的免疫增強(qiáng)作用研究.pdf

1、根據(jù)GenBank中雞白介素6(ChIL-6)基因序列(AJ309540)設(shè)計(jì)一對(duì)引物，采用RT-PCR方法從ConA誘導(dǎo)的四川雅安土雞脾淋巴細(xì)胞總RNA中擴(kuò)增出約600bp的基因片段，克隆到pMD18-T載體，進(jìn)行序列測(cè)定和分析。結(jié)果顯示：該克隆的cDNA全長(zhǎng)603bp，包含了雞IL-6基因的開(kāi)放閱讀框585bp，編碼195個(gè)氨基酸殘基，與GenBank上僅有的1條雞IL-6序列(AJ309540)的同源性為100％。生物信息學(xué)分析表

2、明，該基因編碼的蛋白具有親水性，有很強(qiáng)的抗原性，有3個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)，2個(gè)酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點(diǎn)。該基因經(jīng)XhoI和XbaI雙酶切后，插入同樣經(jīng)XhoI和XbaI雙酶切真核表達(dá)載體pCI-neo中，構(gòu)建出真核表達(dá)質(zhì)粒pCI-IL-6，通過(guò)免疫試驗(yàn)和攻毒試驗(yàn)觀察其對(duì)新城疫LaSota疫苗的免疫增強(qiáng)作用。 將21日齡非免疫健康雛雞100只隨機(jī)分為5組，肌肉免疫(LaSota疫苗組、pCI-IL-6+LaSota疫苗組、pCI-

3、IL-6組、pCI-neo組和PBS組)。通過(guò)檢測(cè)HI抗體、CD4+、CD8+和CD3+T淋巴細(xì)胞百分含量，分析pCI-IL-6對(duì)LaSota疫苗的免疫佐劑效應(yīng)。各組試驗(yàn)雞在免疫接種后的不同時(shí)期，用血凝抑制試驗(yàn)(HI)測(cè)定NDV抗體，結(jié)果表明，pCI-IL-6和LaSota疫苗聯(lián)合免疫組從第14天起就一直高于LaSota疫苗單獨(dú)免疫組，在第14、21、35天時(shí)差異顯著(P＜0.05)，在28天時(shí)差異極顯著(P＜0.01)；pCI-IL-

4、6和LaSota疫苗聯(lián)合免疫組與其它試驗(yàn)組比較差異均極顯著(P＜0.01)。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血代表T細(xì)胞亞群的CD4+、CD8+和CD3+。CD4+T淋巴細(xì)胞百分含量檢測(cè)結(jié)果表明，pCI-IL-6+LaSota疫苗聯(lián)合免疫組與LaSota疫苗單獨(dú)免疫組相比，在14天出現(xiàn)差異顯著(P＜0.05)，在21、28天差異極顯著(P＜0.01)：pCI-IL-6+LaSota疫苗與其它試驗(yàn)組比較均差異極顯著(P＜0.01)。CD8+T淋巴細(xì)胞

5、百分含量檢測(cè)結(jié)果表明，pCI-IL-6+LaSota疫苗聯(lián)合免疫組和LaSota疫苗單獨(dú)免疫組相比，在免疫后14天出現(xiàn)差異極顯著(P＜0.01)，第28天差異顯著(P＜0.05)；14天時(shí)與其它試驗(yàn)組比較均差異極顯著(P＜0.01)。CD3+T淋巴細(xì)胞百分含量測(cè)定結(jié)果表明，LaSota疫苗聯(lián)合佐劑pCI-IL-6組與單獨(dú)LaSota疫苗組比較在7、28、35天差異顯著(P＜0.05)，在14、21天時(shí)差異極顯著(P＜0.01)；與其它試