脾虛證與線粒體基因多態(tài)性及胃泌素和ATP酶的相關(guān)性研究.pdf

1、脾乃臟象學說的核心，脾主運化是中醫(yī)脾胃學說的重要理論之一，脾虛證是中醫(yī)臨床上最常見的一類證候。幾十年來對脾虛證本質(zhì)的研究一直是中西醫(yī)結(jié)合證本質(zhì)研究的熱點。本課題基于導師劉友章教授提出的脾與線粒體的相關(guān)學說和以往的研究為基礎，借助基因與分子生物學技術(shù)，從理論、臨床、實驗三個方面廣泛地探討了脾虛證的病因病機，脾虛證與基因以及胃泌素、ATP 酶的相關(guān)性。 一、文獻與理論研究:通過對古代文獻的整理分析，認為脾虛證的病因病機主要為：先天稟

2、賦不足、濕邪困脾、憂思勞倦或飲食不節(jié)、苦寒藥物損傷脾胃，而致脾失運化，氣血生化乏源或脾失統(tǒng)攝，血液妄行。益氣健脾是脾虛證的治療總則。 關(guān)于脾虛證的現(xiàn)代研究，大多數(shù)學者從脾虛證的致病條件、途徑、物質(zhì)基礎對脾虛致病的機制作了大量研究，認為脾虛證可引起消化吸收功能及能量代謝障礙，血液流變學及微量元素的改變，免疫及內(nèi)分泌生殖功能低下，胃腸激素分泌減少等。 近十余年來，有關(guān)脾與線粒體的相關(guān)性研究，許多學者比較一致地認為：脾虛證可引

3、起線粒體數(shù)目減少，嵴斷裂，超微結(jié)構(gòu)改變，及呼吸鏈氧化酶活性降低，這與劉友章教授八十年代中期提出的脾與線粒體的相關(guān)學說相吻合。脾虛證與基因的相關(guān)性研究尚處于起步階段，深入詳細報道的文獻不多，偶見脾虛與胃癌P53基因表達的相關(guān)性研究。以上研究都表明，有關(guān)脾虛證的各種病理變化都是以“脾胃為病變中心”。 二、臨床研究: 為探討脾虛證與線粒體基因突變及其表達的關(guān)系，本課題依據(jù)嚴格的診斷標準、納入標準、排除標準，將50 例慢性胃炎和

4、消化性潰瘍患者辨證地分為脾氣虛證、脾陽虛證、脾陰虛證、脾胃濕熱證四組，清晨空腹抽取抗凝靜脈血，采用PCR及基因測序的方法檢測患者D 環(huán) HVR1 區(qū) 1528bp 核酸片段的基因序列，并與GenBank 序列進行同源性比較，試圖尋找與脾虛證有關(guān)的堿基突變。同時采用 FQ-PCR 方法檢測患者1528bp 核酸片段的表達。 結(jié)果顯示： (1)1528bp 核酸片段共發(fā)現(xiàn)46個位點，436個堿基變異，其平均變異密度約為1.1

5、2個變異/每人每100個堿基，可變堿基的主要變異形式為堿基轉(zhuǎn)換，其次為插入、缺失和顛換。 (2)1528bp核酸片段16223位點C→T較高的變異頻率(40％)，可能是引起脾虛證的原因之一，其機理尚不明。 (3)脾氣虛證組的堿基平均變異率最高，明顯高于脾陽虛證、脾陰虛證、脾胃濕熱證組(P<0.01或P<0.05)。 (4)消化性潰瘍患者堿基平均變異率顯著高于胃炎患者(P<0.01)。 (5)脾胃濕熱證組

6、1528bp核酸片段的表達明顯高于脾虛證各組(P<0.05)。 (6)各證型組胃炎患者1528bp核酸片段的表達高于消化性潰瘍患者，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 三、實驗研究: 本研究采用陳氏破氣苦降加饑飽失常法復制脾虛證大鼠模型，用放免法檢測大鼠血清胃泌素含量，用定磷酶促法測定大鼠紅細胞膜、肝及骨骼肌線粒體Na<'+>-K<'+>-ATPase和Ca<'2+>-Mg<'2+>ATPase的活性。 結(jié)

7、果顯示： (1)四組益氣健脾中藥治療組和正常對照組GAS含量均高于脾虛模型組，同脾虛模型組比較具有顯著性差異(P<0.01)，益氣健脾中藥治療組GAS含量均高于正常對照組，與正常對照組比較有顯著性差異(P>0.05)(當歸補血湯組除外)。 (2)六組大鼠紅細胞膜ATPase活性的比較，脾虛模型組ATPase活性最低，而益氣健脾中藥組ATPase活性(當歸補血湯組除外)雖比正常對照組稍低(P>0.05)，但均顯著地高于脾虛

8、模型組(P<0.01)，當歸補血湯組ATPase活性升高的程度最低，但高于脾虛模型組(P<0.05)，低于正常對照組(P<0.05)。 (3)肝細胞線粒體ATPase活性的比較，脾虛模型組顯著低于正常對照組(P<0.01)，四組益氣健脾中藥組ATPase的活性稍低于正常對照組，但與脾虛模型組比較均有顯著地升高(P<0.0l或P<0.05)，依次是當歸補血湯合四君子湯組>黃芪四君子湯組>四君子湯組>當歸補血湯組。當歸補血湯組 AT

9、Pase 的活性雖有升高，但明顯低于正常對照組(P<0.05)。 (4)大鼠骨骼肌線粒體ATPase活性的比較，脾虛模型組顯著低于正常對照組和四組益氣健脾中藥組(P<0.01或P<0.05)，黃芪四君子湯組ATPase的活性顯著高于正常對照組(P<0.05)，其它益氣健脾中藥組與正常對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。 四、結(jié)論: 本研究是在劉友章教授提出的脾與線粒體相關(guān)學說的指導下，采用臨床與實驗相結(jié)合的研