五酯膠囊的藥代動力學及與他克莫司相互作用研究.pdf

1、中藥在我國及其他亞洲國家歷史悠久，已經被證明對慢性病具有肯定的治療優(yōu)勢，具有不良反應少、毒性低等特點，在歐美國家逐步受到重視。近年來，隨著全球“回歸自然”呼聲的提高，中藥應用大幅增加。而且多是與化學合成藥物同時使用，尤其是人類免疫缺陷病毒(HIV)感染和癌癥患者為改善精神和生理狀況服用各種中藥的比例更高。以往大多數人認為中藥來源于天然植物，安全無毒，也不會像化學藥一樣易發(fā)生藥物間相互作用。事實上，中藥含有多種生物活性成分，其化學組成與常

2、用化學藥類似，可通過協(xié)同或者拮抗作用共同發(fā)揮生理調節(jié)作用，也存在與多種類型的藥物發(fā)生相互作用的可能。以往人們多重視化學合成藥物之間的相互作用，最近有關中藥和化學藥相互作用而降低療效和導致毒副反應的報道日益增多，已引起了醫(yī)藥界的廣泛關注。
　　 本課題以臨床常用免疫抑制劑他克莫司及純天然保肝藥南五味子為主要研究對象，以HPLC、LC-MS/MS聯(lián)用技術為主要監(jiān)測手段，在對中藥南五味子藥材質量控制研究和他克莫司及五酯膠囊體內定性定量

3、分析方法建立的基礎上，深入探討兩者后體內代謝動力學特征和體外相互作用機制，具體內容包括：
　　 1、本文以南五味子中的主要活性成分木脂素為研究對象，采用反相HPLC梯度洗脫法對南五味子藥材中8種主要木脂素成分進行了多成分含量測定分析，同時運用LC-MS/MS技術對各特征成分進行了鑒別確證。并將檢測方法運用到不同產地15批南五味子藥材及13批制劑五酯膠囊中，方法學考察良好。同時建立15批不同產地南五味子藥材及五酯膠囊的HPLC指紋

4、圖譜，該方法將多成分含量測定與指紋圖譜結合可操作性強，重現(xiàn)性好，為更好地控制南五味子藥材質量提供了科學依據，并為體內藥代動力學研究提供質量穩(wěn)定可靠的供試樣品。
　　 2、本文采用LC-MS/MS技術首次建立了五酯膠囊中5種主要活性成分在大鼠血漿中的定量分析方法，即五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酚及五味子甲素。采用液-液萃取為血漿樣品前處理條件，以聯(lián)苯雙酯為內標，色譜分析采用AgilentZorbax SB-C18(3

5、.5μm，50×2.1 mm，I.D.)，流動相為乙睛-甲醇-0.1％甲酸水(7∶2∶1，V/V/V)內含0.1％甲酸水溶液，流速0.3mL/min，柱溫35℃。運用Agilent G6410A型串聯(lián)質譜的多反應監(jiān)測(MRM)模式正離子檢測，并進行了系統(tǒng)的方法學評價。結果顯示，在各自的生物樣品濃度范圍內，均呈良好線性，r＞0.99；其各成分的線性范圍分別為：0.50-200ng/mL，0.50-50.0ng/mL，0.50-200ng/

6、mL，0.50-50.0ng/mL和0.50-50.0ng/mL，最低定量限分別為：0.5 ng/mL，日內、日間精密度均小于15％，提取回收率均大于86％，該方法操作簡單，選擇性好，靈敏度高，成功用于五酯膠囊大鼠血漿的動力學研究。同時建立了靈敏度高、專屬性強、簡便、準確的LC-MS/MS方法同時測定人體血漿中的五酯膠囊中5種木脂素成分濃度，并研究五酯膠囊在中國健康人體內的藥代動力學特征，為臨床合理用藥提供參考依據。
　　 3、

7、本文建立了他克莫司在大鼠血漿中的定量分析方法，方法學考察均符合要求，并成功用于他克莫司與五酯膠囊合并用藥后藥代動力學的相互作用研究。結果顯示，他克莫司單獨使用，其藥代動力學參數為：Tmax為0.38±0.21h；Cmax為18.87±10.29ng/mL；AUC0→t為40.98±37.07ng h/mL；單次服用五酯膠囊后同時給藥他克莫司，大鼠全血中他克莫司藥代動力學參數顯示：Tmax為1.54±0.15h；Cmax為59.42±30

8、.32ng/mL；AUC0→t為239.71±28.86ng h/mL，其達峰時間及達峰濃度與單獨服用他克莫司時均提高了近5倍；連續(xù)12天多次給藥五酯膠囊，在第12天同時給藥五酯膠囊及他克莫司，其他克莫司藥代動力學參數顯示：Tmax為0.32±0.09h；Cmax為43.16±10.61 ng/mL；AUC0→t為89.21±26.39 ng h/mL。其各代謝參數與空白組相比有所提高或延長，但與單次同服五酯膠囊及他克莫司相比，他克莫司

9、的各藥代參數有所下降，這一結果暗示五酯膠囊在體內不同用量與時間上對他克莫司藥效上可能存在不同程度的協(xié)同或抑制，其作用機理可能更為復雜，當協(xié)同強于抑制時，表現(xiàn)為協(xié)同作用。但就單次給藥五酯膠囊對他克莫司藥代動力學產生顯著的協(xié)同作用是肯定的。在此基礎上，實驗采取隨機分組大鼠灌胃不同劑量五酯膠囊5min后，灌胃他克莫司(1.2mg/kg)，通過對各成分在大鼠血樣中測定所得的血藥濃度求算出各成分藥代動力學參數。結果顯示，他克莫司達峰濃度(Cmax

10、)呈五酯膠囊劑量依賴性變化；他克莫司曲線下面積(AUC)隨五酯膠囊劑量的遞增也逐漸增大，直至五酯膠囊灌胃劑量為450mg/kg時，他克莫司曲線下面積(AUC)上升為最大值825.34 ng h/mL，隨后呈降低趨勢，出現(xiàn)這一平臺期可能與給藥劑量增大，胃中藥量過多難以及時吸收有關。
　　 4、本文采用Caco-2細胞模型為工具，在細胞水平上考察了五酯膠囊及其活性成分對他克莫司吸收的影響，試圖闡明五酯膠囊及其活性成分影響他克莫司吸收

11、過程的作用機制。結果顯示，五味子醇乙、五味子甲素、五味子酯甲及五酯膠囊溶液可明顯抑制他克莫司的吸收外排作用，且五味子甲素的這種抑制作用最強。Caco-2細胞轉運實驗證明了五酯膠囊可通過抑制P-gp對他克莫司的外排作用而使他克莫司口服生物利用度增加。
　　 5、本文采用人肝微粒體體外孵育實驗，系統(tǒng)考察了五酯膠囊及其活性成分對CYP3A4、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6這5種酶活性是否產生作用，從而影響他克