益宮膠囊藥代動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)研究.pdf

1、中藥已成為惡性腫瘤治療的研究熱點(diǎn)，其治療機(jī)理可能是通過改善免疫系統(tǒng)功能來進(jìn)行實(shí)現(xiàn)的。本研究旨在通過研究益宮膠囊的藥代動(dòng)力學(xué)過程及體內(nèi)抗腫瘤作用，揭示其相關(guān)的抗腫瘤作用機(jī)制，從而為將其更好地應(yīng)用于臨床研究提供客觀和科學(xué)的依據(jù)。
　　 本研究首先分析益宮膠囊的藥代動(dòng)力學(xué)過程，通過建立SPE-HPLC 方法，固相萃取血漿后，高效液相色譜法檢測(cè)益宮膠囊中四種重要香豆素的濃度。其次，為了分析益宮膠囊體內(nèi)抗腫瘤作用，本研究建立了小鼠S180

2、 實(shí)體瘤、腹水瘤及環(huán)磷酰胺致小鼠免疫抑制模型，觀察益宮膠囊抑瘤率、生命延長率、增效作用及對(duì)免疫抑制小鼠胸腺、脾臟重量及血清IgG 水平的影響；基于體外分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、脾淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞建立二硝基氯苯所致遲發(fā)型過敏反應(yīng)模型，并采用炭粒廓清法研究益宮膠囊對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響；應(yīng)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)、MTT 法、CCK-8 法、Brdu 法、RT-PCR、Western-Blotting和流式細(xì)胞術(shù)探尋益宮膠囊的免疫增強(qiáng)分子學(xué)機(jī)制；

3、利用HMEC-1細(xì)胞觀察其對(duì)細(xì)胞管腔形成、細(xì)胞遷移的影響。
　　 研究結(jié)果表明，大鼠血漿中四種香豆素達(dá)峰時(shí)間為0.75±0.21 h、1.00±0.32 h、2.00±0.27 h和1.00±0.36 h。單用益宮膠囊 1.6 g·kg-1、3.0 g·kg-1、5.0g·kg-1 對(duì)S180 實(shí)體瘤抑制率為20.99％、26.54％和35.98％；對(duì)S180 腹水型腫瘤小鼠存活時(shí)間延長率為5.15％、11.85％和35.15％

4、；與環(huán)磷酰胺合用時(shí)抑制率為29.44％、38.79％和44.39％；與氟尿嘧啶合用時(shí)對(duì)小鼠存活時(shí)間延長率為14.12％、22.70％和41.42％；可顯著提高免疫抑制小鼠胸腺、脾臟重量指數(shù)及血清IgG 含量（P<0.05）。益宮膠囊 1.6 g·kg-1、3.0 g·kg-1、5.0 g·kg-1 對(duì)正常小鼠和移植瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞的殺瘤率分別為20.99％、29.04％、36.08％；26.69％、30.94％

5、、37.97％；19.09％、27.15％、35.04％；28.53％、31.87％、40.10％；24.26％、26.12％、28.80％；24.54％、29.04％、42.00％；對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力無明顯影響；對(duì)荷瘤小鼠的吞噬指數(shù)K 及校正吞噬指數(shù)?均有增強(qiáng)（P<0.05）。益宮膠囊0.1、1、10 μg/ml 均能激活NF-κB 轉(zhuǎn)錄活性；可使小鼠S180細(xì)胞、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、小鼠脾淋巴細(xì)胞p65mRNA和蛋白的表達(dá)量升高；

6、不能夠激活小鼠S180細(xì)胞、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、小鼠脾淋巴細(xì)胞的NF-κB，MAPKs和PI3K/Akt 信號(hào)通路；可使小鼠S180 腫瘤細(xì)胞阻滯于S 期，但對(duì)HMEC-1細(xì)胞遷移和管腔形成沒有影響。
　　 本研究建立了適合于灌胃給予益宮膠囊后大鼠血漿中四種香豆素的檢測(cè)方法并對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證。本研究的結(jié)果表明，益宮膠囊可顯著抑制小鼠腫瘤生長，增強(qiáng)環(huán)磷酰胺和氟尿嘧啶的抗腫瘤作用并可緩解磷酰胺引起的免疫功能抑制；可提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和

7、脾淋巴細(xì)胞的殺瘤活性，提高自然殺傷細(xì)胞殺傷能力，但不能提高腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力；可增強(qiáng)小鼠DNCB所致遲發(fā)型過敏反應(yīng)，促進(jìn)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能；能激活NF-κB轉(zhuǎn)錄活性；增加細(xì)胞中p65表達(dá)量；對(duì)NF-κB，MAPKs和PI3K/Akt信號(hào)通路無影響；是S期小鼠S180腫瘤細(xì)胞阻滯劑；但在體外不能促進(jìn)HMEC-1內(nèi)皮細(xì)胞遷移且同樣不能促進(jìn)其形成管腔結(jié)構(gòu)。本研究揭示了益宮膠囊在體內(nèi)抗腫瘤的作用機(jī)理，為將其更好地應(yīng)用于臨床研究提供了相關(guān)依